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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50次 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | FS-X9557 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
RAS家族關(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體1-金剛 ADAMANTANOL, 1-(SG)Human, Mouse, Rat
雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體仙鶴草酚 B AGRIMOL B(P)Human, Mouse, Rat
癌
RAS家族關(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體1-金剛 ADAMANTANOL, 1-(SG)Human, Mouse, Rat
雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體仙鶴草酚 B AGRIMOL B(P)Human, Mouse, Rat
癌
詳細(xì)介紹
培養(yǎng)操作步驟：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,，用無菌絲綢布擦拭干凈,，不要用紗布,；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）,；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時,；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測,。
產(chǎn)品屬于：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit | 50次 | 1～3天 |
商品介紹：
本試劑盒是一種采用Annexin V-Alexa Fluor 488與PI雙染法進(jìn)行細(xì)胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。 細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面,，這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外,，使PS暴露在細(xì)胞膜外表面。PS是一種帶負(fù)電荷的磷脂,，正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面,，在細(xì)胞發(fā)生凋亡時細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細(xì)胞膜外。Annexin V具有易于結(jié)合到磷脂類如PS的特性,，對PS有高度的親和性,。因此，該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測暴露在細(xì)胞膜表面的PS,。PS轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所*的,，也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的,，而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就被破壞,。另外一種活細(xì)胞非透過性熒光染料碘化丙啶不能通過完整的活細(xì)胞，但能夠?qū)乃篮偷蛲鐾砥诘募?xì)胞進(jìn)行染色,， 因此通常將Annexin V與PI配合染色,， 以區(qū)別凋亡早期細(xì)胞與壞死細(xì)胞和凋亡的晚期細(xì)胞。 |
操作步驟：
1,、細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：
a．對于貼壁細(xì)胞：小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用,。用胰酶消化細(xì)胞，至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時,，加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液,，吹打下所有的貼壁細(xì)胞,，并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi),。1000×g左右離心3-5分鐘,，沉淀細(xì)胞。對于特定的細(xì)胞,，如果細(xì)胞沉淀不充分,，可以適當(dāng)延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞,。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS,，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞,，小心吸除上清,。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞,，再次離心沉淀細(xì)胞,。
b．對于懸浮細(xì)胞：1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞,。對于特定的細(xì)胞,，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時間或稍稍加大離心力,。小心吸除上清,，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞,。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS,，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi),。再次離心沉淀細(xì)胞,，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS,，以避免吸走細(xì)胞,。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞,，再次離心沉淀細(xì)胞,。
2、用去離子水按1:3稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去離子水),。
3,、用 250μl Binding Buffer重新懸浮細(xì)胞,，調(diào)節(jié)其濃度為 1×106/ml。
4,、取 100μl的細(xì)胞懸液于 5ml 流式管中,，加入 5μl Annexin V-Alexa Fluor 488 和10μl 20μg/ml的PI溶液。
5,、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘,。
6、在反應(yīng)管中加 400μl PBS,，流式細(xì)胞儀(FACS)分析,。
Annexin V-Alexa Fluor 488 PI雙染流式分析圖譜
Jurkat細(xì)胞用順鉑誘導(dǎo)凋亡后用Annexin V-Alexa Fluor 488/PI雙染流式分析圖譜
儲存條件：2～8℃，避光保存
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，最后將1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)elisa試劑盒英文名稱：AECA ELISA Kit載脂蛋白樣蛋白6抗體包裝5g
抗利尿激素/血管加壓素/精氨酸加壓素(ADH/VP/AVP)elisa試劑盒英文名稱：ADH/VP/AVP ELISA Kit凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號抗體包裝100g
抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)elisa試劑盒英文名稱：TRACP-5b ELISA KitA2LD1蛋白抗體包裝25g
抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)elisa試劑盒英文名稱：TRACP5b ELISA Kitα1,4-N-乙酰葡糖轉(zhuǎn)移酶α4Gn-T抗體包裝5g
抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)elisa試劑盒英文名稱：TRACP ELISA Kit芳香乙酰脫乙酰基酶抗體包裝10ml
抗抗體(AsAb)elisa試劑盒英文名稱：AsAb ELISA Kit芳香乙酰脫乙?；笜拥鞍?抗體包裝1g
抗?fàn)钕偾虻鞍卓贵w(ATGA/TGAB)elisa試劑盒英文名稱：ATGA/TGAB ELISA Kit氨基乙二酸半脫氫酶磷酸泛酰巰基乙轉(zhuǎn)移酶抗體包裝25g
抗?fàn)钕龠^氧化物酶抗體(TPO-Ab)elisa試劑盒英文名稱：TPO-Ab ELISA Kit賴氨酸酮戊二酸還原酶抗體包裝5g
抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)elisa試劑盒英文名稱：EMA IgA ELISA Kit錨蛋白重復(fù)域6抗體包裝25g
抗環(huán)胍氨酸肽抗體(Anti-CCP-antibody)elisa試劑盒英文名稱：Anti-CCP-antibody ELISA Kit精氨酸酶2抗體包裝5g
抗紅細(xì)胞抗體(RBC)elisa試劑盒英文名稱：RBC ELISA Kit固酮還原酶家族1成員C3抗體包裝1g
抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)elisa試劑盒英文名稱：gp210 ELISA Kit促腎上腺皮質(zhì)激素受體包裝5g
抗核抗體(ANA)elisa試劑盒英文名稱：ANA ELISA Kit褐黑素相關(guān)蛋白ART抗體包裝1g
抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)elisa試劑盒英文名稱：ssDNA ELISA Kit腎上腺皮質(zhì)線粒體鐵氧還蛋白抗體包裝250mg
抗單核細(xì)胞抗體(AMA)elisa試劑盒英文名稱：AMA ELISA KitAllgrove綜合征相關(guān)蛋白抗體包裝5g
磷酸化粘附相關(guān)激酶抗體促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)Erlotinib Hydrochloride (CP-358774 Hydrochloride) 抑制 EGFR 激酶的 IC5
Alexa Fluor 488/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒正磷酸鐵四水物
其他磷酸高鐵四水物,；磷酸鐵四水物
英文名稱：Ferric phosphate tetrahydrate
其他英文名稱：Iron(III) phosphate tetrahydrate
產(chǎn)品規(guī)格：CP，98%
包裝：250克
CAS號：31096-47-6
FePO4•4H2O=222.88
級別：CP
含量：≥98.0%
氯化物：≤0.1%
砷：≤0.0005%
重金屬：≤0.01%
硫酸鹽：≤0.05%
氯化物：≤0.002%
其它堿金屬：≤1.0%
砷：≤0.0005%
鐵：≤0.005%
重金屬：≤0.002%
性狀：結(jié)晶或粉末,。無氣味,，不吸濕,。溶于水，水溶液近中性
用途：生化研究
保存：RT
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