培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,,不要用紗布,;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí),;
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè),。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
Temsirolimus是一種mTOR抑制劑,IC50值為1.76μM,。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):162635-04-3 別名:Torisel;CCI-779 純度:98.88% 分子量:1030.29 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5,、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h;
6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
芽孢桿菌屬免疫球蛋白超家族成員10抗體Human RIMKLB ELISA KitBeta Agonists(β-)免疫試劑盒
芽胞桿菌大腦和特異性免疫球蛋白超家族成員11抗體Human LRP11(Low-density lipoprotein receptor-related protein 11) ELISA Kit19-Nortestosterone(19-去甲睪)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌鲇澤亞種干擾α受體抗體Human RIMS4 ELISA Kit左右不對(duì)稱發(fā)育因子2(LEFTY2)ELISA試劑盒
焦曲霉磷化干擾α受體抗體Human RIN3 ELISA Kit組織因子途徑抑制物-2(TFPI-2)ELISA試劑盒
玫瑰皮黃鏈霉菌磷化胰島受體β抗體Human RINT1 ELISA Kit組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒
樟疫霉核因子κB抑制蛋白E抗體Human RING1 ELISA Kit組織因子(TF)ELISA試劑盒
貝萊斯芽胞桿菌磷化整合β4抗體Human ribosomal protein L4 ELISA Kit組織型纖溶原激活劑(t-PA)ELISA試劑盒
大腸埃希氏菌磷化整合β4抗體Human RIC8A ELISA Kit組織相容性復(fù)合體Ⅰ類相關(guān)基因A(MICA)ELISA試劑盒
嗜腳動(dòng)物咸海鮮球菌IQCD蛋白抗體Human DDT(D-Dopachrome Tautomerase) ELISA Kit組織相容性2-K1-K區(qū)(H2-K1)ELISA試劑盒
硝鹽還原嗜鹽堿桿菌IQCC蛋白抗體Human RGS5 ELISA Kit組織多肽特異性抗原(TPS)ELISA試劑盒
棲土曲霉IQCA1蛋白抗體Human RGS7(Regulator of G-protein signaling 7) ELISA Kit組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒
矩圓黑盤孢集成復(fù)雜蛋白亞單位3抗體Human RGS9 ELISA Kit組織蛋白去乙?;?HD)ELISA試劑盒
孤島海桿狀菌干擾alpha 14蛋白抗體Human RGSL1 ELISA Kit組織蛋白抗體(Cath Ab)ELISA試劑盒
嗜松籃狀菌白介6抗體Human RHBDD1 ELISA Kit組織蛋白S(CTSS)ELISA試劑盒
環(huán)狀芽胞桿菌白介-10抗體Human RHBDL2 ELISA Kit組織蛋白L1(CTSL1/CTSL)ELISA試劑盒
植物乳桿菌植物亞種白介6抗體Human RHCG ELISA Kit組織蛋白K(cath-K)ELISA試劑盒
: =AS2.590資源名稱: 平滑假絲酵母 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)蘆薈苷
赭鮭色正青霉Eupenicillium│ochrosalmoneum 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)苦玄參苷IB
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)苦玄參苷IA
mTOR抑制劑(Temsirolimus)鏈霉蛋白
其他鏈絲菌蛋白;鏈霉菌蛋白,;蛋白E
英文名稱:Pronase E
其他英文名稱:Actinase E
產(chǎn)品規(guī)格:BR,,4000u/mg
包裝:250毫克
CAS號(hào):9036-06-0
級(jí)別:BR
來(lái)源:From streptomyces griseus
活力(Casein,pH7.4,,40℃):≥4000u/mg
pH范圍:5.0~9.0
分子量:15000~27000
性狀:微褐色粉末,。為從灰色鏈霉菌(Streptomyces griseus)中分離出的一種非特異蛋白水解(Protease)的專有名稱。分子量一般為20000,。易溶于鹽水和稀鹽溶液,,適pH值7.8~8.0
性狀:黃色至黃褐色粉末,微生物提取,,溶于H2O(50mg/mL),、MeOH、1-butanol,、1-propanol,、DMSO、ethanol,、methanol
用途:生化研究,。An reversible cysteine and serine protease inhibitor of trypsin,papain,and cathepsin A and B.Slightly inhibits plasmin
保存:2~8℃