操作規(guī)程:
1,、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,,需根據(jù)細(xì)胞的大小,,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定),。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物,。
3,、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間,。
4,、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5,、每孔加50μL × MTT 溶液,,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜,。
6,、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,,用平板搖床搖勻,。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,,可以使用560-600nm 的濾光片),。
8、結(jié)果分析
a,、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),,各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值,。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱:拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(PNU-159682)
英文名稱:PNU-159682 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg 發(fā)貨周期:1~3天 PNU-159682是Nemorubicin的有效代謝物,,具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性,,為有效的拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑,和ADCs cytotoxin,。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):202350-68-3 純度:95.19% 分子量:641.62 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
注意事項(xiàng):
1,、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,,不可用于診斷或治療。
2,、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失,。
3,、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果,。
4,、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5,、最好使用一次性吸頭,、管、瓶或玻璃器皿,,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑,。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸,。
7,、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,,否則將會(huì)增加空白吸收,,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,,用避光袋或是黑紙,、錫箔紙包住避光。
8,、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物,。如果待測(cè)藥物有還原性,,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度,。如果該吸光度很小,,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,,則需要除去培養(yǎng)基,,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè),。
9,、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10,、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間,。
11,、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可,。
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5-羥色胺受體1F抗體醋桿菌屬小鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞
5-羥色胺受體2A抗體羊肚菌屬(斜面)小鼠氣管和支氣管上皮細(xì)胞
5-羥色胺受體2B抗體水井坊梭菌小鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(PNU-159682)核糖核(牛胰)
其他RNA,;核糖核A(牛胰);核糖核I
英文名稱:Ribonuclease from bovine pancreas
其他英文名稱:Ribonuclease A from bovine pancreas,;RNase I,;RNase;RNase A
產(chǎn)品規(guī)格:高純,,60u/mg
包裝:1克/100毫克/10克
產(chǎn)品規(guī)格:BR,,濃度10mg/ml,60u/mg
包裝:1毫升
CAS號(hào):9001-99-4
級(jí)別:High purity grade
質(zhì)量控制:相關(guān)測(cè)試表明無(wú)內(nèi)切或外切脫氧核糖核,、核糖核污染
性狀:重組,,是一種核糖核內(nèi)切,它能夠特異性地水解雜交到DNA鏈上的RNA磷二酯鍵,,故能分解RNA/DNA雜交體系中的RNA鏈,。該不能消化單鏈或雙鏈DNA。抑制劑有金屬螯合物,、SH-封閉試劑
用途:生化研究,。鏈cDNA合成前除去mRNA;RT-PCR和qRT-PCR,;第一鏈cDNA合成后除去RNA模板,;通過(guò)與oligo(dt)雜交后除去mRNA中poly(A)序列;位點(diǎn)特異性切割RNA,;體外聚腺苷化反應(yīng)物研究
保存:-20℃,,如65℃加熱10分鐘會(huì)失活