培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,,用無菌絲綢布擦拭干凈,,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片),;
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時,;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中,;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Caspase-5活性測定試劑盒 | Caspase-5 Activity colorimetric assay Kit | 20T|50T|100T | 1~3天 |
商品介紹:
本試劑盒適用于測定哺乳動物組織,、細(xì)胞caspase-5活性,。試劑盒測定原理基于Caspase-5特異水解其多肽底物N-acetyl-Trp-Glu-His-Asp-p-nitroanilide(Ac-WEHD-pNA),釋放出游離的硝基pNA,,后者呈黃色在405nm具有大吸收峰,,用可見光分光光度比色方法測定,吸光度值對應(yīng)于Caspase-5的水解活性,。 |
細(xì)胞凋亡屬于程序化細(xì)胞死亡,,可見于各種器官和細(xì)胞,在正常發(fā)育,、生理,、病理過程中對細(xì)胞和器官的穩(wěn)態(tài)具有十分重要的調(diào)節(jié)作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細(xì)胞凋亡過程的蛋白酶家族,,包含10多個成員,。Caspase-5分子量47.7kD,與ICE有51%的同源性,,在過量表達時可誘導(dǎo)凋亡發(fā)生,。
所需儀器:酶標(biāo)儀與96孔酶標(biāo)板;或可見光分光光度計配100μl容積的石英比色杯,。
工作波長:大吸收波長405nm,,如不具備也可在400~450nm范圍內(nèi)測定。
實驗報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h;
6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
谷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1H-Benzotriazole因子受體樣因子1抗體包裝500g
谷維(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Betahistine Dihydrochloride半胱亞磺脫羧抗體包裝1g
呱西替柳(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Betahistine Dihydrochloride型肝炎NS2反式調(diào)節(jié)蛋白/衰老相關(guān)的基因10蛋白抗體包裝25g
呱西替柳雜質(zhì)A(楊愈創(chuàng)木酚酯)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Betahistine Dimesilate固酮合成CYP11B2抗體包裝5g
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: INSULIN分裂周期蛋白8抗體包裝1g
桂美(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bismuth oxide 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體包裝1g
果糖二磷鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-Chloro-1,3-propanediol分裂周期蛋白16抗體包裝5g
哈西奈德(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bisoprolol fumarate有絲分裂著絲粒蛋白F抗體包裝5g
核黃磷鈉混合物(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bromhexine HCl9號染色體開放閱讀框115抗體包裝25g
紅霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bupivacaine HClCTDSPL蛋白抗體包裝5g
胡椒乙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bupivacaine HClCTDSPL2蛋白抗體包裝1g
琥珀,;丁二(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Butenafine HCl乙酰酯相關(guān)蛋白抗體包裝1g
琥珀多西拉敏(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Captopril卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白83抗體包裝250mg
琥珀潑尼龍(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Captopril二氫嘧啶相關(guān)蛋白5抗體包裝5g
琥珀普卡必利英文名稱: (S)-Carbidopa磷化二氫嘧啶樣2抗體包裝1g
: NRS-1000ATCC43897DSM3037資源名稱: 強壯類芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BP2007,EP5.心肌營養(yǎng)1試劑盒維生A;Vitamin A
微小鏈霉菌Streptomyces│parvulus 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%心肌特異性肌鈣蛋白T試劑盒烏頭原堿;Aconine
多頭節(jié)叢孢Arthrobotrys│polycephala 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品心肌錨蛋白重復(fù)域1試劑盒烏美司;Ubenimex
Caspase-5活性測定試劑盒鹽吉西他濱
其他吉西他賓鹽鹽;4-基-1-(3,3-二氟-4-羥基-5-羥甲基四氫呋喃-2-基)-1H-嘧啶-2-酮鹽鹽,;吉西他濱鹽鹽,;鹽吉西他賓
英文名稱:LY-188011
其他英文名稱:dFdC;dFdCyd,;Gemcitabine hydrochloride,;2′-Deoxy-2′,2′-difluorocytidine;Gemzar (Lilly)
產(chǎn)品規(guī)格:BR
包裝:250毫克/1克/5克
CAS號:122111-03-9
C9H11F2N3O4•HCl=299.66
級別:BR
含量:≥98.0%(HPLC)
性狀:粉末或塊狀物
用途:生化研究,。
用途:生化研究,。
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