培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片),;
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí),;
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中,;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
Pluronic F-127是一種非離子型表面活性劑,,它具有100%的活性并且對(duì)細(xì)胞相對(duì)無(wú)毒性的,常與染料AM酯一起使用,,以增強(qiáng)其水溶性,。它在低溫下可溶,但是在室溫下成凝膠狀,。 |
使用Pluronic? F-127 作為探針加載助溶劑由于某些AM 酯在水溶液中不溶解,,低毒性的Pluronic? F-127 常常被用于促進(jìn)細(xì)胞加載染料。這種非離子型的去污劑在在DMSO 中的終濃度可以達(dá)到20%(w/v),。有時(shí)在制備儲(chǔ)液時(shí),,也會(huì)用到Pluronic? F-127,40 度溫和加熱可以協(xié)助Pluronic? F-127 溶于DMSO,,但Pluronic? F-127 可以降低AM 酯的穩(wěn)定性,,所以,,建議好僅在工作液中使用Pluronic? F-127。
備注:Pluronic? F-127 制備成20%的DMSO 儲(chǔ)液后,,避光保存,,有效期6 個(gè)月。
儲(chǔ)存:RT,,有效期12個(gè)月,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1,、無(wú)菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5,、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二,、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
鹽替羅非班(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: D-(?)-Salicin轉(zhuǎn)錄因子ERF抗體包裝1g
鹽替扎尼定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: D-(?)-Salicin磷化轉(zhuǎn)錄因子ERF抗體包裝5g
鹽頭孢吡肟 (標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Magnolol真核肽鏈釋放因子1抗體包裝10MG
鹽頭孢噻呋(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Magnolol真核肽鏈釋放因子3a抗體包裝1g
鹽頭孢他美酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Esomeprazole magnesium trihydrate表皮生長(zhǎng)因子受體底物15抗體包裝5g
鹽土霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Rutin內(nèi)吞作用輔助蛋白EPN1抗體包裝10MG
鹽托烷司瓊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Rutin內(nèi)吞作用輔助蛋白EPN2抗體包裝100g
鹽妥拉唑林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Neosperidin dihydrochalcone內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位蛋白ERGI3抗體包裝25g
鹽妥洛特羅(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Neosperidin dihydrochalcone內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化物蛋白Ero1-Lα抗體包裝5g
鹽萬(wàn)古霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Oxymatrine內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白ERp19抗體包裝25g
鹽維拉帕米(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Oxymatrine內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白ERp72抗體包裝5g
鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Andrographolide結(jié)核分枝桿菌分泌性蛋白ESAT6抗體包裝100g
鹽戊乙奎(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Andrographolide真核翻譯起始因子1抗體包裝25g
鹽西替利(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Apigenin上皮粘連調(diào)控蛋白ESRP2抗體包裝500g
鹽溴己新(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: ApigeninT和嗜性粒表達(dá)特應(yīng)性皮炎蛋白ETEA抗體包裝1g
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定糖原磷化同工II試劑盒;Strychnine
菲羅茄畢赤氏酵母Pichia│philogaea 質(zhì)量規(guī)格:>855ug/MG,USP30糖原磷化同工BB試劑盒山姜;Alpinetin
平滑假絲酵母Candida│parapsilosis 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定糖原磷化試劑盒D-松;D-Pinitol
PluronicF-127辛烷磺鈉
其他 1-辛烷磺鈉,;1-辛基磺鈉,;辛烷基磺鈉;正辛烷磺鈉
英文名稱: Sodium 1-octanesulfonate
其他英文名稱: 1-Octanesulfonic acid sodium salt,;IPC-ALKS-8
產(chǎn)品規(guī)格: IPC,,98%
包裝:5克/25克/100克/500克
CAS號(hào):5324-84-5
C8H17NaO3S=216.27
級(jí)別:離子對(duì)試劑IPC
含量:≥98.0%
pH(100g/L,,25℃):5.5~7.5
吸光度試驗(yàn)(200nm):≥70.0%
吸光度試驗(yàn)(220nm):≥90.0%
吸光度試驗(yàn)(250nm):≥98.0%
干燥失重:≤2.0%
性狀:至類結(jié)晶粉末,,對(duì)光敏感。1g溶于10ml水中。相對(duì)密度(d204)1.015,。熔點(diǎn)>300℃,。折光率(n20D)1.3450。有刺激性,。
用途:生化研究,。高壓液相色譜離子締合試劑,用于肽和蛋白質(zhì)分析,。制備抗靜電聚酯纖維用中間體,。表面活性劑。
保存:RT,,避光