中文名稱:膠原酶II型
英文名稱:Collagenase II
產(chǎn)品規(guī)格:100mg
發(fā)貨周期:1~3天
本品為II型膠原酶,,≥125 U/mg solid,,可用于心,、甲狀腺,、唾液腺,、肝、骨,、軟骨等組織和細(xì)胞的解離,。本品來源于溶組織梭菌(Clostridium histolyticum),,是一種酶粗提物,,不僅含有膠原酶(更準(zhǔn)確的稱法為梭菌蛋白酶A(clostridiopeptidase A)),能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維,。還含有其他的一些蛋白酶,、多糖酶、脂酶等,,分別能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白,,多糖和脂質(zhì),,使得本品非常適用于組織消化。 |
膠原酶(Collagenase)是一種蛋白酶,,一種肽鏈內(nèi)切酶,,能夠特異性的識(shí)別Pro-X-Gly-Pro序列(該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中,很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中)并切割該序列中性氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之間的肽鍵,。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽,,但膠原酶是一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶,這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織內(nèi),。
目前商業(yè)化提供的細(xì)菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異,,分為四種類型:膠原酶I型,II型,,III型和IV型,,在應(yīng)用上有所偏向:
1)膠原酶I(Type I Collagenase):含有比較均勻的各種酶活力(包括膠原酶、酪蛋白酶,、梭菌蛋白酶,、胰蛋白酶活性)。通常用作上皮細(xì)胞,、肝,、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的制備,;
2)膠原酶II(Type II Collagenase):含有更高的梭菌蛋白酶活性,,通常用于心臟、骨,、肌肉,、胸腺和軟骨等組織來源細(xì)胞的制備;
3)膠原酶III(Type III Collagenase):含有較低的蛋白酶活性,,常用于乳腺細(xì)胞的制備,;
4)膠原酶IV(Type IV Collagenase):含有低胰酶活性,通常用于胰島細(xì)胞的制備,,或者需要維持受體完整性的細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn),。
酶活力單位定義
在37℃,pH7.5 的條件下,,5h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當(dāng)于1μM L-亮氨酸的酶量定義為1個(gè)酶活力單位,。
儲(chǔ)存條件:4℃,有效期兩年
注意事項(xiàng):
1,、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,,不可用于診斷或治療。
2,、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,,避免開蓋時(shí)試劑損失。
3,、禁止與其他品牌的試劑混用,,否則會(huì)影響使用效果。
4,、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果,。
5、最好使用一次性吸頭,、管,、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑,。
6,、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7,、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存,。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,,從而影響檢測(cè)結(jié)果,。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙,、錫箔紙包住避光,。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測(cè)藥物,。如果待測(cè)藥物有還原性,,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度,。如果該吸光度很小,,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,,則需要除去培養(yǎng)基,,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè),。
9,、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10,、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間,。
11,、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可,。
舒(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Omeprazole磷化CD19抗體包裝5g
替潑諾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Omeprazole著絲粒蛋白A包裝25g
維地平丁酯/丁維地平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chlorzoxazone磷化著絲粒蛋白A包裝5g
硝柳(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chlorzoxazone磷化二氫嘧啶樣2抗體包裝100g
氧喹(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: D-Glucosamine hydrochloride克拉拉蛋白抗體包裝25g
唑沙宗(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: D-Glucosamine hydrochlorideB淋巴粘附分子CD22抗體包裝5MG
羅司特(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Droperidol組織蛋白G抗體包裝1g
羅紅霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Droperidol激分子B7-1蛋白抗體包裝5g
羅哌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 6-Mercaptopurine monohydrate1號(hào)染色體開放閱讀框145抗體包裝100ml
羅硝唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Paracetamol(Acetaminofen polvo)20號(hào)染色體開放閱讀框186抗體包裝25ml
蘿巴新(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Paracetamol(Acetaminofen polvo)角蛋白7抗體包裝500ml
螺內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Olaparib,AZD2281,KU0059436間隙連接蛋白26抗體包裝100ml
螺旋霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Quinidine膜輔蛋白抗體包裝500ml
洛伐他汀(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Monolaurin/1-Lauroyl-rac-glycerolF肌動(dòng)蛋白α1亞基抗體包裝250g
洛莫司?。?biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: MonooleinCD8抗體包裝50g
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:potency>765 µg of erythromycin (C37H67NO13) per mg,USP35色P450試劑盒脫穿心蓮內(nèi)酯;Dehydroandro
根瘤菌(紫云英)Mesorhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BP/USP色c氧化亞基VIB多肽1試劑盒土貝母苷;Tubeimoside I
: ivcas7.00213資源名稱: 蘇云金芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品色c氧化亞基5B,線粒體試劑盒甜菜堿;Betaine
膠原酶II型亞硫基二乙
其他 硫代二乙;硫代二乙,;硫代二甘,;亞硫基二乙;硫代羥基乙,;2,2'-硫代二乙
英文名稱: 2,2′-Thiodiacetic acid
其他英文名稱: 2,2′-Thio-bis(acetic acid), Dicarboxydimethyl sulfide,;Thiodiglycolic acid
產(chǎn)品規(guī)格: BR,98%
包 裝: 25克/100克/500克
CAS號(hào):123-93-3
C4H6O4S=150.15
級(jí)別:BR
含量:≥98.0%(滴量滴定)
熔點(diǎn):128~131℃
干燥失重:≤0.5%
性狀:至淺黃色結(jié)晶, 溶于水,,溶于,,不溶于
用途:生化研究。
保存:RT
操作規(guī)程:
1,、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,,需根據(jù)細(xì)胞的大小,,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2,、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物,。
3、將96孔板在37℃,,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間,。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液,。
5,、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),,使MTT 還原為甲臜,。
6、吸出上清液,,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,,用平板搖床搖勻。
7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a,、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),,各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD,。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值,。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)