中文名稱:Caspase 9 活性檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Caspase 9 Activity Assay Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20次|100次
發(fā)貨周期:1~3天
本試劑盒是采用分光光度法檢測(cè)細(xì)胞或組織裂解液中caspase 9酶活性或純化的caspase 9酶活性的試劑盒,。
Caspase是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族,。Caspase 9也稱ICE-LAP6或Mch6,,有時(shí)被寫作caspase-9或caspase 9,,是細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中比較上游的一個(gè)caspase,。線粒體釋放細(xì)胞色素以后,,caspase 9可以和細(xì)胞色素以及Apaf1形成復(fù)合物,,同時(shí)被激活,。激活的caspase 9可以激活細(xì)胞凋亡的最關(guān)鍵酶caspase 3,,從而促進(jìn)后續(xù)的細(xì)胞凋亡信號(hào)。Caspase 9的激活可以通過磷酸化進(jìn)行調(diào)控,。 本Caspase 9活性檢測(cè)試劑盒是基于caspase 9可以催化底物Ac-LEHD-pNA(acetyl-Leu-Glu-His-Asp p-nitroanilide)產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline),,從而可以通過測(cè)定吸光度來檢測(cè)caspase 9的活性。pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收,。 |
試劑盒中提供了caspase 9催化產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物pNA,,可以作為定量caspase 9酶活性的標(biāo)準(zhǔn)品。
試劑盒組分:
裂解液——————8ml
檢測(cè)緩沖液——————8ml
Ac-LEHD-pNA(2mM)———200μl
pNA(10mM)——————200μl
儲(chǔ)存條件:-20℃
注意事項(xiàng):
1,、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,,不可用于診斷或治療。
2,、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失,。
3,、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果,。
4,、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5,、最好使用一次性吸頭,、管、瓶或玻璃器皿,,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑,。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸,。
7,、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,,否則將會(huì)增加空白吸收,,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,,用避光袋或是黑紙,、錫箔紙包住避光。
8,、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測(cè)藥物,。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度,。如果該吸光度很小,,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,,則需要除去培養(yǎng)基,,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè),。
9,、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10,、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間,。
11,、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可,。
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Caspase 9 活性檢測(cè)試劑盒植酸鈉
其他 肌醇六磷酸鈉,;六磷酸環(huán)己六醇鈉鹽,;環(huán)己六醇六磷酸鈉鹽
英文名稱: Phytic acid sodium salt hydrate
其他英文名稱: Inositol hexaphosphoric acid sodium salt;Sodium phytate
產(chǎn)品規(guī)格: 高純,,98%
包裝:100克/500克
CAS號(hào):14306-25-3
C6H18O24P6 • xNa+ • yH2O=660.04 (anhydrous free acid basis)
級(jí)別:Hig purity grade
含量:≥98.0%
氯化物:≤0.02%
重金屬:≤0.003%
性狀:或灰粉末,。有吸濕性。溶于水,,水溶液呈中性,。
用途:生化研究。微量重金屬的絡(luò)合劑,。金屬除去劑,。
保存:RT
操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,,需根據(jù)細(xì)胞的大小,,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2,、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物,。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間,。
4,、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5,、每孔加50μL × MTT 溶液,,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜,。
6,、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,,用平板搖床搖勻,。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,,可以使用560-600nm 的濾光片),。
8、結(jié)果分析
a,、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),,各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD,。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值,。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)