培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布,;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片),;
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中,;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,,將培養(yǎng)板取出,,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測,。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Caspase 2分光光度法檢測試劑盒 | Caspase-2 Colorimetric Assay Kit | 20T|50T|100T | 1~3天 |
商品介紹:
本試劑盒適用于培養(yǎng)細胞及新鮮組織caspase-2 檢測,。Caspase 家族在介導(dǎo)細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用。Caspase-2(Nedd2/ICH-1)是遺傳毒性壓力(genotoxic stress)誘導(dǎo)的細胞凋亡信號途徑中的啟動酶,,可能對于caspase-9 和caspase-3 激活和凋亡的下游事件誘導(dǎo)有重要的意義,。caspase-2 的表達與組織的發(fā)育階段有關(guān),均表達于心臟,、腎和腦,。Caspase-2 分光光度法檢測試劑盒是將caspase-2 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團,,當(dāng)該底物被caspase-2 剪切后,發(fā)色基團即游離出來,,可通過酶標(biāo)儀或分光光度計(λ=405nm 或400nm)測定其吸光值,,可考察caspase-2 的活化程度。 |
注意事項
1. Caspase-2 Substrate 避光保存及使用,。
2. 對某些凋亡誘導(dǎo)劑引起的細胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-2 活化的機制,,這種情況時利用本試劑盒檢測Caspase-2 活性無明顯改變,需要考慮凋亡機制中的其他信號通路,。
3. 細胞數(shù)量需達到3~5×106 個或新鮮組織50~100mg,以便能達到測定需要的100~200μg 蛋白的要求,,因為Caspase-2 的活性與細胞裂解液的蛋白含量有關(guān),,如測定的OD 值偏低,可通過增加細胞數(shù)量或組織量的方法來提高蛋白量,。
實驗報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,;
2,、PBS沖洗細胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3,、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細胞30min,;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,;
5、PBS沖洗細胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h,;
6,、用PBS沖洗3次,每次10min,,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
蛋白聚糖4(PRG4)elisa試劑盒英文名稱:PRG4 ELISA Kit磷酸化自噬相關(guān)蛋白3抗體包裝5g
蛋白激酶B(PKB)elisa試劑盒英文名稱:PKB ELISA Kit縮酶2抗體包裝1g
蛋白激酶A(PKA)elisa試劑盒英文名稱:PKA ELISA Kit胰腺α淀粉酶抗體包裝25g
蛋白C(Protein C)elisa試劑盒英文名稱:Protein C ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體包裝5g
膽囊收縮素/腸促胰酶肽(CCK)elisa試劑盒英文名稱:CCK ELISA Kit磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體包裝100mg
膽囊收縮素(CCK)elisa試劑盒英文名稱:CCK ELISA Kit磷酸化活化復(fù)制因子2抗體包裝100mg
膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)elisa試劑盒英文名稱:ChAT ELISA Kit固酮還原酶家族1成員D1抗體包裝25g
膽堿磷酸甘油酯(PC/CPG)elisa試劑盒英文名稱:PC/CPG ELISA Kit肝血管生成素相關(guān)蛋白抗體包裝5g
膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)elisa試劑盒英文名稱:CETP ELISA Kit自解酶結(jié)構(gòu)域5蛋白抗體包裝25g
膽固醇(CH)elisa試劑盒英文名稱:CH ELISA Kit酰基硫酯酶8包裝5g
單核細胞趨化蛋白5(MCP-5)elisa試劑盒英文名稱:MCP-5 ELISA Kit溶血磷脂酸?;D(zhuǎn)移酶β抗體包裝25g
單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)elisa試劑盒英文名稱:MCP-4/CCL13 ELISA KitAFP4b蛋白抗體包裝5g
單核細胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)elisa試劑盒英文名稱:MCP-3/CCL7 ELISA Kit載脂蛋白C2抗體包裝100g
單核細胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)elisa試劑盒英文名稱:MCP-2/CCL8 ELISA Kit載脂蛋白A5抗體包裝25g
單核細胞趨化蛋白1(MCP-1)elisa試劑盒英文名稱:MCP-1 ELISA Kit載脂蛋白A2抗體包裝5g
凋亡蛋白活性因子-1抗體(N端)結(jié)締組織生長因子(CTGF)CGK733 是一種有效的 ATM/ATR 抑制劑,,用于癌癥研究,。
Caspase 2分光光度法檢測試劑盒原花青素B2
其他 原矢車菊素B2
英文名稱: Procyanidin B2
其他英文名稱: 4,8″-Bi-[(+)-epicatechin];cis,cis″-4,8″-Bi(3,3′,4′,5,7-pentahydroxyflavane)
產(chǎn)品規(guī)格: BR,,98%
包 裝: 25毫克
CAS號:29106-49-8
C30H26O12=578.52
級別:BR
含量:≥98.0%
性狀:紅棕色粉末,,氣微、味澀,,溶于水和大多有機溶劑,。
用途:生化研究。是一種有著特殊分子結(jié)構(gòu)的生物類黃酮,,是自由基有效的天然抗氧化劑
保存:2~8℃