中文名稱:AO-EB雙染色試劑盒
英文名稱:Acridine Orange(AO)/EB Double Stain Kit
產(chǎn)品規(guī)格:50ml*2|250ml*2
發(fā)貨周期:1~3天
橙能透過(guò)胞膜完整的細(xì)胞,,嵌入細(xì)胞核DNA,,與雙鏈DNA結(jié)合后發(fā)出綠色熒光,,溴化乙錠(EB)僅能透過(guò)胞膜受損的細(xì)胞,,嵌入核DNA,,發(fā)橘紅色熒光,。二者很容易判別,。在熒光顯微鏡下觀察,,可見四種細(xì)胞形態(tài):活細(xì)胞(VN),核染色質(zhì)著綠色并呈正常結(jié)構(gòu),;早期凋亡細(xì)胞(VA),,核染色質(zhì)著綠色呈固縮狀或圓珠狀;晚期凋亡細(xì)胞(NVA),,核染色質(zhì)為橘紅色并呈固縮狀或圓珠狀,;非凋亡的死亡細(xì)胞(NVN),核染色質(zhì)著橘紅色并呈正常結(jié)構(gòu),。本產(chǎn)品AO,、EB 溶液濃度分別為100ug/ml,所含穩(wěn)定劑不影響實(shí)驗(yàn)效果,。 |
使用方法:(僅供參考)
1,、使用前先根據(jù)用量,將AO溶液和EB溶液按1:1混合成工作液,,現(xiàn)用現(xiàn)配,。
2.1、對(duì)于貼壁細(xì)胞或爬片,,去掉培養(yǎng)基,,用 PBS 洗兩遍去除殘余培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞,加入新的 PBS,;如果需要觀察全部細(xì)胞特性,,保留未貼壁細(xì)胞,可以直接在培養(yǎng)基中加入工作液,。按照每毫升培養(yǎng)基或 PBS 中加入 20ul 工作液即可,。室溫放置 2-5min 后,用 PBS 洗 2 次,除去殘余的熒光染料,。加入新的 PBS 或培養(yǎng)基于熒光顯微鏡下觀察即可,。
2.2、對(duì)于懸浮細(xì)胞,,可直接加入工作液或離心收集細(xì)胞后在 PBS 中加入工作液,。按照每毫升培養(yǎng)基或 PBS 中加入 20ul 工作液即可。室溫放置 2-5min 后,,離心去除工作液,,后用 PBS 洗 2 次,除去殘余的熒光染料,。加入新的 PBS 或培養(yǎng)基于熒光顯微鏡下觀察即可,。
3、建議用藍(lán)光激發(fā),,視野下可以觀察到死細(xì)胞呈現(xiàn)紅色,,活細(xì)胞呈現(xiàn)綠色。
保存:4℃避光密封保存,,有效期一年,。
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,,不可用于診斷或治療,。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,,避免開蓋時(shí)試劑損失。
3,、禁止與其他品牌的試劑混用,,否則會(huì)影響使用效果。
4,、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果,。
5、最好使用一次性吸頭,、管,、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑,。
6,、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7,、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存,。避免反復(fù)凍融,,否則將會(huì)增加空白吸收,,從而影響檢測(cè)結(jié)果,。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙,、錫箔紙包住避光,。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物,。如果待測(cè)藥物有還原性,,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度,。如果該吸光度很小,,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,,則需要除去培養(yǎng)基,,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè),。
9,、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10,、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間,。
11,、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可,。
磺加貝酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Glimepiride鈣粘附蛋白8抗體包裝1g
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Griseofulvin;Fulcin6號(hào)染色體開放閱讀框174抗體包裝5g
磺帕珠沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Griseofulvin6號(hào)染色體開放閱讀框150抗體包裝25g
磺培沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sodium hyaluronateX染色體開放閱讀框56抗體包裝5g
磺齊拉西酮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Hydrocortisone9號(hào)染色體開放閱讀框152抗體包裝25g
磺伊馬替尼(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Hydrocortisone6號(hào)染色體開放閱讀框58抗體包裝5g
基斑蝥(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ibutilide fumarate 接觸蛋白相關(guān)蛋白4抗體包裝1g
基丁香酚(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ibutilide fumarate CD24抗體包裝1g
基原薯蕷皂苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Isepamicine Sulphate接觸蛋白相關(guān)蛋白3抗體包裝100g
硫二馬尼(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: BexaroteneCD24抗體包裝25g
硫新斯的明(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bexarotene限局性核因子3抗體包裝1g
巰咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ketoprofen胰羧肽A6抗體包裝250mg
巰咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ketoprofen9號(hào)染色體開放閱讀框150抗體包裝5g
硝唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ketotifen fumarate鈣粘附蛋白9抗體包裝1g
硝唑雜質(zhì)A(2-基-5-硝基咪唑)標(biāo)準(zhǔn)品英文名稱: Ketotifen fumarate鈣粘蛋白15抗體包裝5g
: =AS3.951資源名稱: 米曲霉 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP腺苷環(huán)化1試劑盒五味子乙;Schisandrin B
: 75-049資源名稱: 非O1群霍亂弧菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G2試劑盒土克甾酮;Turkesterone
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP32腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1試劑盒土貝母皂苷乙;TubeiMoside I
AO-EB雙染色試劑盒鹽付玫瑰胺
其他副品紅,;鹽副薔薇胺;鹽副玫瑰胺,;付玫瑰胺鹽鹽,;付品紅;鹽副品紅,;堿性紅9,;一品紅
英文名稱:Parafuchsin hydrochloride
其他英文名稱:Parafuchsin;Pararosaniline hydrochloride,;C.1.42500
產(chǎn)品規(guī)格:BS
包裝:25克
CAS號(hào):569-61-9
C19H18ClN3=323.82
級(jí)別:BS
生物染色試驗(yàn):合格
性狀:有綠色光澤的結(jié)晶或棕紅色粉末,。易溶于乙呈緋紅色,熱水呈紅色,,微溶于冷水,。在濃硫中呈黃光棕色,,稀釋后呈紫紅色。曾有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物致癌試驗(yàn)陽(yáng)性的報(bào)道,。
用途:生化研究,。生物染色
保存:RT
操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定),。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物,。
3,、將96孔板在37℃,,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間,。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液,。
5,、每孔加50μL × MTT 溶液,,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜,。
6,、吸出上清液,,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,,用平板搖床搖勻。
7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8,、結(jié)果分析
a,、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,,無(wú)細(xì)胞),,各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值,。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)