操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定),。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物,。
3,、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間,。
4,、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5,、每孔加50μL × MTT 溶液,,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜,。
6,、吸出上清液,,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻,。
7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片),。
8,、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD,。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值,。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b,、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱:PI3Kδ抑制劑(ZSTK474)
英文名稱:ZSTK474 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg 發(fā)貨周期:1~3天 ZSTK474對(duì)I類PI3K亞型,尤其是PI3Kδ有抑制活性,,IC50為37nM,。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號(hào):475110-96-4 純度:99.56% 分子量:417.41 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用,。 |
注意事項(xiàng):
1,、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療,。
2,、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失,。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,,否則會(huì)影響使用效果,。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果,。
5,、最好使用一次性吸頭、管,、瓶或玻璃器皿,,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6,、避免皮膚或粘膜與試劑接觸,。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存,。避免反復(fù)凍融,,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果,。最好小劑量分裝,,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光,。
8,、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,,則測(cè)定不含細(xì)胞,,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,,則可以直接加入 MTS ,,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9,、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞,。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11,、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
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抑癌基因Rbms3抗體萊廷格熱袍菌Paenibacillus dauci
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其他N-乙酰-L-白,;N-乙?;?L-亮
英文名稱:N-Acetyl-L-leucine
其他英文名稱:(S)-N-Acetylleucine;Ac-Leu-OH
產(chǎn)品規(guī)格:BR,,99%
包裝:5克/25克/100克/500克
CAS號(hào):1188-21-2
C8H15NO3=173.21
級(jí)別:BR
含量:≥99.0%
熔點(diǎn):187~190℃
比旋光度:-22~-24deg(C=2,,C2H5OH)
性狀:結(jié)晶粉末。水中溶解度:0.81%(20℃)
用途:生化研究
保存:RT