培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,,不要用紗布,;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片),;
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時,;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中,;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
DASA-58是一種高度特異的小分子PKM2激動劑,DASA-58抑制LPS誘導(dǎo)的HIF-1α和IL-1β,以及一系列其它Hif-1α依賴基因的表達(dá),。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1203494-49-8 純度:98.01% 分子量:453.53 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實驗報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h;
6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
卡利比克畢赤酵母軸突蛋白3抗體Human KIM-1(Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激2(Tie-2)ELISA試劑盒
長根菇1號染色體開放閱讀框63抗體Human SCFR/c-Kit(Stem Cell Factor Receptor) ELISA Kit含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激1(Tie-1)ELISA試劑盒
榨菜檸檬球菌神經(jīng)元特異性蛋白家族成員2抗體Human IL-15(Interleukin 15) ELISA Kit含SET域4(setd4)ELISA試劑盒
粘紅酵母神經(jīng)前體發(fā)育下調(diào)蛋白4抗體Human IL-29(Interleukin 29) ELISA Kit含patatin樣磷脂域3(PNPLA3/ADPN/C22orf20)ELISA試劑盒
天藍(lán)色鏈霉菌*泛結(jié)合E2F抗體Human ACTα1(Actin Alpha 1, Skeletal Muscle) ELISA Kit過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物(LPO)ELISA試劑盒
草鹽貪銅菌鼻咽癌相關(guān)蛋白6抗體Human KLK1(Kallikrein-1) ELISA Kit過氧化脂質(zhì)(LPO)ELISA試劑盒
梭菌神經(jīng)4抗體Human IL-16(Interleukin 16) ELISA Kit過氧化物體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑盒
生金鏈霉菌N-乙?;咸烟羌た贵wHuman IL-17E/IL-25(Interleukin 25) ELISA Kit過氧化物體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒
硝孢鏈霉菌核因子1B抗體Human IL-1alpha(Interleukin 1 Alpha) ELISA Kit過氧化物體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)ELISA試劑盒
雜色曲霉原變種維甲誘導(dǎo)神經(jīng)母瘤蛋白1抗體Human IGFBP-1(Insulin-like growth factor-binding protein 1) ELISA Kit過氧化氫(CAT)ELISA試劑盒
釀酒酵母轉(zhuǎn)錄延伸因子NELF抗體Human IL-1beta(Interleukin 1 Beta) ELISA Kit過敏/補(bǔ)體片斷4(C4a)ELISA試劑盒
多根硬皮馬勃蛋白激C結(jié)合蛋白NELL1抗體Human IL1R1(Interleukin 1 Receptor Type I) ELISA Kit果糖二磷縮A(ALDOA)ELISA試劑盒
米氏假單胞菌蛋白激C結(jié)合蛋白NELL2抗體Human IGFBP-2(Insulin-like growth factor-binding protein 2) ELISA Kit果糖(FRA)ELISA試劑盒
大豆慢生根瘤菌腦特異性跨膜蛋白抗體Human GAL9(Galectin-9) ELISA Kit果糖1,6二磷縮(FDA)ELISA試劑盒
德爾布有孢酵母核因子1A抗體Human IL1R2(Interleukin 1 Receptor Type II) ELISA Kit廣譜角蛋白(P-CK)ELISA試劑盒
大西洋交替紅色桿菌環(huán)一螺旋蛋白1抗體Human G-CSF(Granulocyte Colony Stimulating Factor 3) ELISA Kit胱抑SN(CST1)ELISA試劑盒
葡萄座腔菌Botryosphaeria│dothidea (Moug.) Ces. & De Not. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR秦皮
: AS2.114資源名稱: 羅倫隱球酵母 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR黃芩
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR野黃芩苷
小分子PKM2激動劑(DASA-58)焦油紫
其他醋甲酚紫;甲酚紫,;甲酚青蓮,;甲酚紫乙鹽
英文名稱:Cresyl Violet acetate
其他英文名稱:9-Amino-5-imino-5H-benzo(a)phenoxazine acetate salt
產(chǎn)品規(guī)格:BR,70%
包裝:1克/5克/25克
CAS號:10510-54-0
C18H15N3O3=321.33
級別:BR
含量Dye content:~70%
熔點:140~143℃
發(fā)光靈敏性試驗:合格
堿溶液試驗:合格
熔點:140~143℃
性狀:淡黃色結(jié)晶,。易溶于堿液,,能溶于稀,不溶于水和有機(jī)溶劑,,難溶于,。中性或淡性溶液暴露在紫外光中時,顯強(qiáng)烈的亮藍(lán)色熒光,。熔點319~320℃,。魯米諾是一種古老的和常用的試劑,在堿性條件下可被過氧化物氧化,,同時發(fā)光,,魯米諾和過氧化物之間的氧化還原反應(yīng)需要催化劑,這種催化劑一般為多價金屬離子,、過氧化物如鐵,、辣根過氧化物等,此種方法常用于檢測過氧化物,、重金屬,、過氧化物的含量,,以及由此衍生的檢測自由基、進(jìn)行毒物分析和基于過氧化物和葡萄糖氧化的分析方法,。在通常情況下魯米諾與過氧化氫在某些催化劑存在時化學(xué)發(fā)光反應(yīng)非常迅速。常用催化劑是金屬離子,,在很大濃度范圍內(nèi),,金屬離子濃度與發(fā)光強(qiáng)度成正比,從而可進(jìn)行某些金屬離子的化學(xué)發(fā)光分析,,利用這一反應(yīng)可以分析那些含有金屬離子的有機(jī)化合物,,達(dá)到很高的靈敏度。其次是利用有機(jī)化合物對魯米諾化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的抑制作用,,測定對化學(xué)發(fā)光反應(yīng)具有猝滅作用的有機(jī)化合物,。其三是通過偶合反應(yīng)間接測定無機(jī)或有機(jī)化合物
用途:生化研究。發(fā)光測試: Emmax 440 nm (化學(xué)發(fā)光,; 60 mM K2S2O8, 100 mM K2CO3, pH 11.5,; 添加H2O2后),化學(xué)發(fā)光試劑及指示劑,,常用于化學(xué)發(fā)光分析,,如金屬陽離子、血液等
保存:RT,,避光