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詳細(xì)介紹
使用方法
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7,，6,，5，4,，3,，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,，*用帶芯槍頭,，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL,，試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
5. 換槍頭,，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
二,、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8. 如果有 N 個(gè)樣品,，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對(duì)照管,、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管,。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系,，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板）,，6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,，并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板）,，1 個(gè)用于PCR 陽性對(duì)照。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,！
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
普氏立克次氏體PCR檢測(cè)試劑盒 | Rickettsia prowazekiiPCR | 50T |
儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
定量PCR方法：
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個(gè)探針,，在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),，這個(gè)時(shí)候，兩個(gè)平衡不發(fā)光,，但是當(dāng)DNA通過引物合成的時(shí)候,，探針被折斷，釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),，兩個(gè)距離較遠(yuǎn),，發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光，被機(jī)器收集到信號(hào),，從而檢測(cè)基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合,，當(dāng)PCR擴(kuò)增的時(shí)候，染料結(jié)合到DNA上,，從而發(fā)光,，單個(gè)的染料不發(fā)光，這樣就能收集到信號(hào),，我們可以看出,，染料法特異性不強(qiáng)，只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光,。 | 在快速PCR中,，通過縮減PCR步驟所需時(shí)間來完成更快的擴(kuò)增，且不會(huì)影響擴(kuò)增產(chǎn)量和效率,?？焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴(kuò)增能力的DNA聚合酶，這類聚合酶在每個(gè)結(jié)合中可引入更多的核苷酸,。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時(shí)間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時(shí)間的1/2至1/3,，卻能維持較高的擴(kuò)增效率。此外,，如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,，則可將它們合并為一步，以進(jìn)一步縮短PCR時(shí)間,。這一過程也被稱為 兩步PCR法,。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定和病原微生物,，某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定,，是在同一PCR反應(yīng)管中同時(shí)加上多種病原微生物的特異性引物,，進(jìn)行PCR擴(kuò)增.可用于同時(shí)檢測(cè)多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。 |
相關(guān)產(chǎn)品：
西尼羅病毒PCR檢測(cè)試劑盒
西部馬腦脊髓炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒
同白斑綜合癥病毒PCR檢測(cè)試劑盒
高首鱘虹彩病毒PCR檢測(cè)試劑盒
PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞,，室溫放置5分鐘使其溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀,?；靹蚝螅?span>4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度
ZADH1： 鋅結(jié)合乙醇脫氫酶結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 0.2ml
DYRK1A： 絲酸/蘇酸蛋白MNB抗體 0.2ml
銜接蛋白β抗體 Anti-beta Adaptin/AP2 0.1ml
Anti-Gentamicin Monoclonal Antibody /Gold 膠體金離子標(biāo)記小鼠抗單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.5ml(35nm-40nm)
Rhesus antibody Rh phospho-ER-beta(ser87) 0酸化雌激素受體β抗體 規(guī)格 0.1ml
Defensin Beta2/beta-defensin 2/BD-2(rat) 防御素β2抗原(大鼠)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
小鼠Ⅰ(FⅠ)ELISA試劑盒 ,，英文名： FⅠ ELISA Kit
小鼠白介素27(IL-27)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseIerleukin27,IL-27ELISAKit 96T/48T
人防御素 免疫試劑盒 Human defensins ELISA Kit
Ratleoopichormone,LHELISAKit大鼠促黃體激素(LH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
CYTOCHROMEC(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克
MouseN-terminalpro-brainnaiureticpeptide,-proBNPELISA試劑盒小鼠N端前腦素(-proBNP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
普氏立克次氏體PCR檢測(cè)試劑盒CD4(Rabbit Anti-Human Mouse rat CD4 Palyclonal Anti-body) CD4抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Anti-Phospho-HP1 gamma (Ser83) 0酸化染色質(zhì)相關(guān)蛋白1-γ抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh PCDHB15/PCDHB22 原鈣粘蛋白15抗體 規(guī)格 0.2ml
IL17RA Kit Human 人 IL17RA / CD217 ELISA配對(duì)抗體 ELISA
THRA1+2 英文名稱： 甲狀腺激素受體α1+α2抗體 0.2ml
Collagen I 英文名稱： Ⅰ型膠原抗體 0.1ml
Anti-Phospho-HP1 gamma (Ser83) 0酸化染色質(zhì)相關(guān)蛋白1-γ抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
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