PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱(chēng):馬紅球菌PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng):Rhodococcus equiPCR
規(guī)格:50T
分類(lèi):PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融,。
運(yùn)輸:低溫、避光,,快遞免費(fèi)送貨上門(mén),。
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相關(guān)產(chǎn)品:
坎氏弧菌PCR檢測(cè)試劑盒
型PCR檢測(cè)試劑盒
通用PCR檢測(cè)試劑盒
河流弧菌PCR檢測(cè)試劑盒
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備 | 二,、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,,而不能從無(wú)到有,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,。可以是DNA也可以是RNA,,一般20多bp,,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP,、dCTP、dGTP,、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)???1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,,不加或添加石蠟油,。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min,。
3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油;否則,,直接取5-10μl電泳檢測(cè),。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子,。底物B對(duì)光敏感,,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸,有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A、B液時(shí),,避免使用帶金屬部分的加樣器 ,。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,,以免變質(zhì),。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。
TRIM21: 核糖核蛋白抗原抗體 0.2ml
EID1: 乙?;D(zhuǎn)移酶EID1抗體 0.2ml
CD7抗體 Anti-CD7 0.1ml
Anti-VEGF-D/FIGF/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人,、大、小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子D型VEGFD抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-GPS1/CSN1(Ser474) 0酸化G蛋白通路抑制蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml
Cdc2/P34CDC2/CDK1(Cell division control protein 2) 周期素依賴(lài)1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
小鼠Ⅲ(FⅢ)ELISA試劑盒 ,,英文名: FⅢ ELISA Kit
小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseFactorⅧ-relatedAigen,FⅧAgELISAKit 96T/48T
人非小細(xì)胞肺癌相關(guān)抗原211(CA211)免疫試劑盒 Human cyfra211,CA211 ELISA kit
RatL-SelectinELISAKit大鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
CYP2B1蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒25次
Mouseniicoxidesyhase,NOSELISA試劑盒小鼠合成酶(NOS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
馬紅球菌PCR檢測(cè)試劑盒Fibronectin (FN) 纖維連結(jié)蛋白(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-CD10/CALLA CD10抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PAX2 配對(duì)盒基因2抗體 規(guī)格 0.1ml
CD5L Kit Mouse 小鼠 CD5L ELISA配對(duì)抗體 ELISA
Thrombin Activation peptide fragment 1 英文名稱(chēng): (II)激活肽1抗體 0.1ml
Corin 英文名稱(chēng): 心臟特異性絲酸抗體 0.2ml
Anti-CD10/CALLA CD10抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),,請(qǐng)按一次用量分裝,,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。