化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
使用方法
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,，分別為 7,，6，5,，4,，3，2,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL,，試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
5. 換槍頭,，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
二,、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品,，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管,。
三,、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板）,，6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板）,，1 個(gè)用于PCR 陽性對(duì)照,。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,！
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
牛血吸蟲PCR檢測試劑盒 | Schistosoma bovisPCR | 50T |
儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請(qǐng)按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
定量PCR方法：
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個(gè)探針,，在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán)，這個(gè)時(shí)候,，兩個(gè)平衡不發(fā)光,，但是當(dāng)DNA通過引物合成的時(shí)候，探針被折斷,，釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),，兩個(gè)距離較遠(yuǎn)，發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光,，被機(jī)器收集到信號(hào),，從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合，當(dāng)PCR擴(kuò)增的時(shí)候,，染料結(jié)合到DNA上,，從而發(fā)光，單個(gè)的染料不發(fā)光,，這樣就能收集到信號(hào),，我們可以看出，染料法特異性不強(qiáng),，只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光,。 | 在快速PCR中，通過縮減PCR步驟所需時(shí)間來完成更快的擴(kuò)增,，且不會(huì)影響擴(kuò)增產(chǎn)量和效率,。快速循環(huán)條件尤其適用于具有高擴(kuò)增能力的DNA聚合酶，這類聚合酶在每個(gè)結(jié)合中可引入更多的核苷酸,。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時(shí)間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時(shí)間的1/2至1/3,，卻能維持較高的擴(kuò)增效率。此外,，如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,，則可將它們合并為一步，以進(jìn)一步縮短PCR時(shí)間,。這一過程也被稱為 兩步PCR法,。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時(shí)檢測或鑒定和病原微生物，某些遺傳病及癌基因的分型鑒定,。多種病原微生物的同時(shí)檢測或鑒定,，是在同一PCR反應(yīng)管中同時(shí)加上多種病原微生物的特異性引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增.可用于同時(shí)檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染,。 |
相關(guān)產(chǎn)品：
卡氏肺胞子蟲PCR檢測試劑盒
柯薩奇病毒A16型PCR檢測試劑盒
柯薩奇病毒A24型PCR檢測試劑盒
柯薩奇病毒PCR檢測試劑盒
PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞,，室溫放置5分鐘使其溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,，測定RNA溶液 濃度和純度
ZNF415： 鋅指蛋白415抗體 0.2ml
DUX3： DUX3蛋白抗體 0.2ml
P53凋亡刺激蛋白2抗體 Anti-ASPP2 0.1ml
Anti-VWF/PE 熒光素PE標(biāo)記血管性血友病因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-EIF4EBP1(Ser100) 0酸化eIF4E結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
EGFL7(EGF-like domain containing protein 7) 類表皮生長因子域7抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
小鼠內(nèi)皮型合酶(NOS3)ELISA試劑盒 ，英文名： NOS3 ELISA Kit
人促胃液素受體(GsaR)ELISA檢測試劑盒Humangasieceptor,GsaRELISAKit 96T/48T
大鼠乙酰 免疫試劑盒 Rat acetyl-CoA ELISA Kit
英文名稱HumanCCL1ELISAKit人CCL1規(guī)格：96T/48T
非同位素HRP-DAB顯色法DNA斑點(diǎn)雜交試劑盒5次
ELISAKitCENP-B人著絲粒蛋白B規(guī)格：48T/96T
牛血吸蟲PCR檢測試劑盒MAG (Myelin associated glycoprotein; L-MAG;MAG-a ) 髓鞘相關(guān)糖蛋白(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Anti-CD31/PECAM-1 血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh PAFAH1B2 血小板衍化生長因子β抗體 規(guī)格 0.2ml
CD5 Kit Mouse 小鼠 CD5 ELISA配對(duì)抗體 ELISA
TFCP2C 英文名稱： 轉(zhuǎn)錄因子CP2抗體 0.2ml
Complement component C9a 英文名稱： 補(bǔ)體C9a抗體 0.1ml
Anti-CD31/PECAM-1 血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
化工儀器網(wǎng)