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參考價	面議

產(chǎn)品簡介

供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	50T
應(yīng)用領(lǐng)域	化工	主要用途	用于科學(xué)實驗
英文名稱	Spring Viraemia of Carp Virus(SVCV)RTPCR	儲存條件	-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融
分類	PCR檢測試劑盒

鯉春病毒血癥病毒PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：鴨源性成分Co1基因(Duck-Co1)檢測試劑盒
鴨源性成分Cytb基因(Duck-Cytb)檢測試劑盒
鴨源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
牙齦卟啉單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒

詳細介紹

使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,，分別為 7，6,，5,，4，3,，2,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭,，下同）,。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
4. 換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
5. 換槍頭,，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取,，多出的一個用作樣品制備陽性對照管,、另一個用作樣品制備陰性對照管,。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系,，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,，并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，1 個用于PCR 陽性對照。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,！

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格
鯉春病毒血癥病毒PCR檢測試劑盒	Spring Viraemia of Carp Virus(SVCV)RTPCR	50T

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激,，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

定量PCR方法：

熒光定量PCR探針法	熒光定量PCR SYBR Green染料法	快速PCR	多重 PCR
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個探針,，在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團和淬滅集團,，這個時候，兩個平衡不發(fā)光,，但是當(dāng)DNA通過引物合成的時候,，探針被折斷，釋放出發(fā)光集團和淬滅集團,，兩個距離較遠,，發(fā)光集團產(chǎn)生熒光,，被機器收集到信號，從而檢測基因的量	染料能夠與雙鏈結(jié)合,，當(dāng)PCR擴增的時候,，染料結(jié)合到DNA上，從而發(fā)光,，單個的染料不發(fā)光,，這樣就能收集到信號，我們可以看出,，染料法特異性不強,，只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光。	在快速PCR中,，通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴增,，且不會影響擴增產(chǎn)量和效率?？焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴增能力的DNA聚合酶,，這類聚合酶在每個結(jié)合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時間的1/2至1/3,，卻能維持較高的擴增效率,。此外，如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,，則可將它們合并為一步,，以進一步縮短PCR時間。這一過程也被稱為兩步PCR法,。	多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定和病原微生物,，某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時檢測或鑒定,，是在同一PCR反應(yīng)管中同時加上多種病原微生物的特異性引物,，進行PCR擴增.可用于同時檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。

相關(guān)產(chǎn)品：
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PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞,，室溫放置5分鐘使其溶解,。
②兩相分離每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋,。手動劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀,?；靹蚝螅?span>4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀溶解RNA時,，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,，測定RNA溶液濃度和純度
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