詳細(xì)介紹
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
猴免疫缺陷病毒PCR檢測(cè)試劑盒 | Simian Immunodeficiency Virus(SIV)RTPCR | 50T |
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),,請(qǐng)按一次用量分裝,,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
定量PCR方法:
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個(gè)探針,在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),,這個(gè)時(shí)候,,兩個(gè)平衡不發(fā)光,但是當(dāng)DNA通過引物合成的時(shí)候,,探針被折斷,,釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),兩個(gè)距離較遠(yuǎn),發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光,,被機(jī)器收集到信號(hào),,從而檢測(cè)基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合,當(dāng)PCR擴(kuò)增的時(shí)候,,染料結(jié)合到DNA上,,從而發(fā)光,單個(gè)的染料不發(fā)光,,這樣就能收集到信號(hào),,我們可以看出,染料法特異性不強(qiáng),,只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光,。 | 在快速PCR中,通過縮減PCR步驟所需時(shí)間來完成更快的擴(kuò)增,,且不會(huì)影響擴(kuò)增產(chǎn)量和效率,。快速循環(huán)條件尤其適用于具有高擴(kuò)增能力的DNA聚合酶,,這類聚合酶在每個(gè)結(jié)合中可引入更多的核苷酸,。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時(shí)間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時(shí)間的1/2至1/3,卻能維持較高的擴(kuò)增效率,。此外,,如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,則可將它們合并為一步,,以進(jìn)一步縮短PCR時(shí)間,。這一過程也被稱為 兩步PCR法。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定和病原微生物,,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定,,是在同一PCR反應(yīng)管中同時(shí)加上多種病原微生物的特異性引物,,進(jìn)行PCR擴(kuò)增.可用于同時(shí)檢測(cè)多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。 |
相關(guān)產(chǎn)品:
牛錐蟲PCR檢測(cè)試劑盒
瘧原蟲PCR檢測(cè)試劑盒
諾沃克病毒PCR檢測(cè)試劑盒
偏肺病毒PCR檢測(cè)試劑盒
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,,室溫放置5分鐘使其溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,,于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),,清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,,使其溶解,,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度
ZO-1: 胞質(zhì)緊密粘連蛋白1抗體(閉鎖小帶蛋白1) 0.1ml
DBF4A: S期活化蛋白DBF4A抗體 0.2ml
氧化還原因子1抗體 Anti-APEX1/Ref-1 0.1ml
Anti-HBsAg/FITC 熒光素標(biāo)記山羊抗人乙肝表面抗原抗體 IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-EphB1/Eph receptor B1(Tyr331) 0酸化酪蛋白受體B1抗體 規(guī)格 0.1ml
DNA-PKcs peptide DNA依賴蛋白催化亞基多肽抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
小鼠腦素(BNP)ELISA試劑盒 ,,英文名: BNP ELISA Kit
人泛素連接酶(E3/UBPL)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanE3/ubiquitin-proteinligase,E3/UBPLELISAKit 96T/48T
大鼠胰多肽 免疫試劑盒 Rat Pancreatic prohormone,PPY ELISA kit
英文名稱HumanAβ1-40proteinELISAKit人Aβ1-40蛋白規(guī)格:96T/48T
分離溶酶體度雙酶法(COX/AP)檢測(cè)試劑盒20次
ELISAKitMHCⅡ/HLA-Ⅱ人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類規(guī)格:48T/96T
猴免疫缺陷病毒PCR檢測(cè)試劑盒TM(Thrombomodulin) 血栓調(diào)節(jié)蛋白多肽Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-CACH2/CaV1.2 L型鈣通道蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Pdk4 酸脫氫酶4抗體 規(guī)格 0.1ml
Calcitonin (CT)降鈣素 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝
Tenascin C 英文名稱: 細(xì)胞粘合素(固生蛋白)抗體 0.1ml
CENPA 英文名稱: 著絲粒蛋白A 0.1ml
Anti-CACH2/CaV1.2 L型鈣通道蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
使用方法
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,,分別為 7,,6,5,,4,,3,2,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,,*用帶芯槍頭,下同),。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
5. 換槍頭,,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管,、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三,、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性分析,,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),,1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照,。