PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱(chēng):尼泊爾葡萄球菌PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng):Staphylococcus nepalensisPCR
規(guī)格:50T
分類(lèi):PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融,。
運(yùn)輸:低溫,、避光,快遞免費(fèi)送貨上門(mén),。
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一,、試劑準(zhǔn)備 | 二、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,,而不能從無(wú)到有,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,??梢允?span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP,、dCTP,、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中,。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)???1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油,。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴(kuò)增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油;否則,,直接取5-10μl電泳檢測(cè),。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。
④底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸,有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A,、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 ,。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,以免變質(zhì),。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,,不可保存,。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
化大鼠腎上腺髓質(zhì)素(AM)基因重組表達(dá)載體(pGEFP-AM)10微克 64849-39-4甜葉懸鉤子苷說(shuō)明書(shū) Rubusoside
RatHistoneDeacetylase,HDELISA試劑盒大鼠組織蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 20137-37-5鐵冬青酸品牌 Rutundicacid
小鼠脂多糖/內(nèi)(LPS)ELISA試劑盒 ,,英文名: LPS ELISA Kit 191729-45-0苷H規(guī)格 Tenacissoside H
小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouseα1-Acidglycoprotein,α1-AGPELISAKit 96T/48T 928151-78-4苷F Tenacissoside F
人巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)試劑盒 Human MIF ELISA Kit 191729-44-9苷I說(shuō)明書(shū) Tenacissoside I
小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA試劑盒 ,,英文名: ANX-Ⅴ ELISA Kit
大鼠C肽(C-Peptide)ELISA檢測(cè)試劑盒RatC-PeptideELISAKit 96T/48T
人多巴胺脫羧酶(DDC)免疫試劑盒 Human dopamine decarboxylase,DDC ELISA Kit
Ratmaixmetalloproteinase8/Neuophilcollagenase,MMP-8ELISAKit大鼠基質(zhì)金屬8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
DNA產(chǎn)物0酸化處理試劑盒10次
MousePhospholipidaseA2,PL-A2ELISA試劑盒小鼠0脂酶A2(PL-A2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
尼泊爾葡萄球菌PCR檢測(cè)試劑盒sTNF Alpha-RI(humen) 人可溶性壞死因子-受體1Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-C-Mer/MERTK c-mer原癌基因酪抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh NPY/Neuropeptide Y 神經(jīng)肽Y抗體 規(guī)格 0.1ml
SP Kit(Broad Spectrum) 廣譜SP免疫組化檢測(cè)試劑盒(用于檢測(cè)兔、大鼠,、小鼠和豚鼠來(lái)源的一抗) 3ml
TCHP 英文名稱(chēng): 抑癌蛋白TCHP抗體 0.2ml
C7orf13 英文名稱(chēng): 7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框13抗體 0.2ml
Anti-C-Mer/MERTK c-mer原癌基因酪抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),,請(qǐng)按一次用量分裝,,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。