特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
瑟氏泰勒蟲PCR檢測試劑盒 | Theileria sergentiPCR | 50T |
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,,請按一次用量分裝,,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
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定量PCR方法:
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個探針,在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團和淬滅集團,,這個時候,,兩個平衡不發(fā)光,但是當(dāng)DNA通過引物合成的時候,,探針被折斷,,釋放出發(fā)光集團和淬滅集團,兩個距離較遠,,發(fā)光集團產(chǎn)生熒光,被機器收集到信號,,從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合,,當(dāng)PCR擴增的時候,染料結(jié)合到DNA上,,從而發(fā)光,,單個的染料不發(fā)光,這樣就能收集到信號,我們可以看出,,染料法特異性不強,,只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光。 | 在快速PCR中,,通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴增,,且不會影響擴增產(chǎn)量和效率??焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴增能力的DNA聚合酶,,這類聚合酶在每個結(jié)合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時間的1/2至1/3,,卻能維持較高的擴增效率,。此外,如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,,則可將它們合并為一步,,以進一步縮短PCR時間。這一過程也被稱為 兩步PCR法,。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定和病原微生物,,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時檢測或鑒定,,是在同一PCR反應(yīng)管中同時加上多種病原微生物的特異性引物,,進行PCR擴增.可用于同時檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。 |
相關(guān)產(chǎn)品:
異尖線蟲(Ani)核酸檢測試劑盒
廣州管圓線蟲(AC)核酸檢測試劑盒
肺炎支原體(MP)核酸檢測試劑盒
埃博拉病毒(EBOV)核酸檢測試劑盒
PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,,室溫放置5分鐘使其溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋,。手動劇烈振蕩管體15秒后,,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,,使其溶解,,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度
小鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒 ,,英文名: TPO-Ab ELISA Kit
大鼠肌球蛋白(Myosin)ELISA檢測試劑盒RatMyosinELISAKit 96T/48T
人單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫試劑盒 Human MCP-1 ELISA kit
RatProgesteronereceptor,PROGRELISAKit大鼠孕同受體(PROGR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Hanks鈣鎂平衡鹽緩沖溶液(HBSS)不含NaHCO3500毫升
Mousei-iodothyronine,T3ELISA試劑盒小鼠狀腺原(T3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Anti-PDK1/PDPK1/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人,、大、小鼠30酸肌醇依賴性蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Streptavidin/FITC 熒光素標(biāo)記鏈霉親和素Multi-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
表皮生長因子受體-8抗體 Anti-EGFR-ⅤⅢ 0.2ml
Rabbit Anti-human sIgA/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml
phospho-FADD (Ser194) 英文名稱: 0酸化Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-TCF3/E2A/E47(Ser39) 0酸化轉(zhuǎn)錄因子3抗體 規(guī)格 0.1ml
Streptavidin/FITC 熒光素標(biāo)記鏈霉親和素Multi-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
瑟氏泰勒蟲PCR檢測試劑盒MAG-a (Myelin associated glycoprotein; L-MAG; ) 髓鞘相關(guān)糖蛋白-a(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-CD33/Siglec-3 CD33抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PAF 血小板活化因子抗體 規(guī)格 0.1ml
CD34 Kit Mouse 小鼠 CD34 ELISA配對抗體 ELISA
T4/L-Thyroxine 英文名稱: 甲狀腺素T4抗體 0.2ml
Cytokeratin 5 英文名稱: 細(xì)胞角蛋白5抗體 0.1ml
Anti-CD33/Siglec-3 CD33抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
使用方法
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例),。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分),。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,,6,,5,4,,3,,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,,*用帶芯槍頭,,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,,試劑盒提供),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
5. 換槍頭,,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,,多出的一個用作樣品制備陽性對照管,、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三,、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,,在樣品制備室進行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性分析,,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照,。