使用方法
一,、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例),。由于標準品濃度非常高,,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分),。
1. 標記 6 個離心管,分別為 7,,6,,5,4,,3,,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,,*用帶芯槍頭,,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,,試劑盒提供),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用,。
4. 換槍頭,,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用。
5. 換槍頭,,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用,。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用,。
二,、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8. 如果有 N 個樣品,,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管,、另一個用作樣品制備陰性對照管,。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,,在樣品制備室進行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),,6 個用于標準曲線。如果做定性分析,,并且只做 1 次重復(fù),,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),,1 個用于PCR 陽性對照。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
毛癬菌通用PCR檢測試劑盒 | Trichophyton spp.PCR | 50T |
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儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過程中避免任何細胞刺激,,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,,請按一次用量分裝,,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
定量PCR方法:
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個探針,在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團和淬滅集團,,這個時候,,兩個平衡不發(fā)光,但是當DNA通過引物合成的時候,,探針被折斷,,釋放出發(fā)光集團和淬滅集團,兩個距離較遠,,發(fā)光集團產(chǎn)生熒光,,被機器收集到信號,,從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合,,當PCR擴增的時候,染料結(jié)合到DNA上,,從而發(fā)光,,單個的染料不發(fā)光,這樣就能收集到信號,,我們可以看出,,染料法特異性不強,只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光,。 | 在快速PCR中,,通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴增,且不會影響擴增產(chǎn)量和效率,??焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴增能力的DNA聚合酶,這類聚合酶在每個結(jié)合中可引入更多的核苷酸,。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時間的1/2至1/3,,卻能維持較高的擴增效率。此外,,如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,,則可將它們合并為一步,,以進一步縮短PCR時間。這一過程也被稱為 兩步PCR法,。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定和病原微生物,,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時檢測或鑒定,,是在同一PCR反應(yīng)管中同時加上多種病原微生物的特異性引物,,進行PCR擴增.可用于同時檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。 |
相關(guān)產(chǎn)品:
牛型放線菌PCR檢測試劑盒 Actinomyces bovisPCR.皮炎外瓶霉PCR檢測試劑盒 Exophiala dermatitidisPCR.派琴蟲通用PCR檢測試劑盒 PerkinsusPCR
PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,,室溫放置5分鐘使其溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋,。手動劇烈振蕩管體15秒后,,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀,?;靹蚝螅?span>4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,,使其溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,,測定RNA溶液 濃度和純度
小鼠顆粒酶A(GZMA)ELISA試劑盒 ,,英文名: GZMA ELISA Kit
人芳香烴受體(AhR)ELISA檢測試劑盒Humanarylhydrocarboeceptor,AhRELISAKit 96T/48T
大鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)免疫試劑盒 Rat Serum amyloid A,SAA ELISA Kit
英文名稱RatLPSELISAKit大鼠脂多糖(LPS)規(guī)格:96T/48T
高多糖多酚植物組織葉綠體DNA萃取試劑盒10/20次
ELISAKitfPSA人游離前列腺特異性抗原規(guī)格:48T/96T
Anti-SCN1A/FITC 熒光素標記電壓閥門通道蛋白a1/癲癇相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
rSLT/SLT-IIe(O139)(Shiga-Like Toxin Type II Variant) 重組豬水腫素蛋白(細胞因子O139)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2mg
兔抗小鼠IgA抗體 Anti-Mouse IgA 0.2ml
SRF 英文名稱: 血清應(yīng)答因子抗體 0.2ml
FAM166A 英文名稱: FAM166A蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr751) 0酸化血小板源性生長因子受體-B抗體 規(guī)格 0.1ml
rSLT/SLT-IIe(O139)(Shiga-Like Toxin Type II Variant) 重組豬水腫素蛋白(細胞因子O139)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2mg
毛癬菌通用PCR檢測試劑盒MIP-2 大鼠巨噬細胞炎性蛋白-2Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-E2F5 轉(zhuǎn)錄因子E2F-5抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh NALP2/PAN1/PYPAF2 富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml
Human 2,3-dinor thromboxane B2,2,3-dinor-TXB2 ELISA Kit 人2,3Dinor血栓烷B2 96T
Supervillin 英文名稱: 監(jiān)理蛋白抗體 0.1ml
CXCR5 英文名稱: 細胞表面趨化因子受體5抗體 0.1ml
Anti-E2F5 轉(zhuǎn)錄因子E2F-5抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml