PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱(chēng):木霉屬通用PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng):Trichoderma spp.PCR
規(guī)格:50T
分類(lèi):PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融,。
運(yùn)輸:低溫、避光,,快遞免費(fèi)送貨上門(mén),。

相關(guān)產(chǎn)品:
無(wú)色桿菌屬通用PCR檢測(cè)試劑盒 Achromobacter spp.PCR.超廣譜內(nèi)酰胺酶大腸埃希菌PCR檢測(cè)試劑盒 ESBLEscherichia coliβPCR.產(chǎn)紫青霉PCR檢測(cè)試劑盒 Penicillium purpurogenumPCR
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備 | 二,、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允?span>DNA也可以是RNA,,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP,、dGTP,、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中,。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)???1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,,不加或添加石蠟油,。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min,。
3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油;否則,,直接取5-10μl電泳檢測(cè),。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。
④底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸,有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A、B液時(shí),,避免使用帶金屬部分的加樣器 ,。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,,以免變質(zhì),。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,,不可保存,。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒 ,,英文名: ACA-IgM ELISA Kit
大鼠肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA檢測(cè)試劑盒RatMyoglobin,MYO/MBELISAKit 96T/48T
人蛋白(肽酰脯氨酰順/反異構(gòu)酶)NIMA結(jié)合1(PIN1)免疫試劑盒 Human PIN1 ELISA Kit
Ratplaceagrowthfactor,PLGFELISAKit大鼠胎盤(pán)生長(zhǎng)因子(PLGF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
GSK-3BETA蛋白免疫共沉淀分析試劑盒5次
Mousethrombieceptor,ELISA試劑盒小鼠受體()ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Anti-TREML1/TLT1/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人,、大、小鼠髓系細(xì)胞觸發(fā)受體樣轉(zhuǎn)錄因子1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Secretin receptor 分泌素受體(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因3抗體 Anti-TSARG3 0.2ml
SMURF1 英文名稱(chēng): Smad蛋白E3泛素連接酶1抗體 0.1ml
ELF1 英文名稱(chēng): 轉(zhuǎn)錄因子ELF1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-IRS1(Ser1101) 0酸化胰島素受體底物-1抗體 規(guī)格 0.1ml
Secretin receptor 分泌素受體(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
木霉屬通用PCR檢測(cè)試劑盒PINP 大鼠I型前膠原肽Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-DISC1(NT) DISC1 N端抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh NDRG3 抑癌基因NDRG3抗體 規(guī)格 0.1ml
Human Immunoglobulin A,IgA ELISA Kit A 96T
SYNC 英文名稱(chēng): 微管卷曲蛋白SYNC抗體 0.2ml
CCL6 英文名稱(chēng): 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白CCL6抗體 0.2ml
Anti-DISC1(NT) DISC1 N端抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。