特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
黃熱病病毒PCR檢測(cè)試劑盒 | Yellow Fever Virus(YFV)RTPCR | 50T |
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),,請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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定量PCR方法:
熒光定量PCR探針?lè)?/span> | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針?lè)闯艘锿饬硗庠O(shè)置一個(gè)探針,,在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),,這個(gè)時(shí)候,兩個(gè)平衡不發(fā)光,,但是當(dāng)DNA通過(guò)引物合成的時(shí)候,,探針被折斷,釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),,兩個(gè)距離較遠(yuǎn),,發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光,被機(jī)器收集到信號(hào),,從而檢測(cè)基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合,,當(dāng)PCR擴(kuò)增的時(shí)候,染料結(jié)合到DNA上,,從而發(fā)光,,單個(gè)的染料不發(fā)光,這樣就能收集到信號(hào),,我們可以看出,,染料法特異性不強(qiáng),只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光,。 | 在快速PCR中,,通過(guò)縮減PCR步驟所需時(shí)間來(lái)完成更快的擴(kuò)增,且不會(huì)影響擴(kuò)增產(chǎn)量和效率??焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴(kuò)增能力的DNA聚合酶,,這類聚合酶在每個(gè)結(jié)合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時(shí)間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時(shí)間的1/2至1/3,,卻能維持較高的擴(kuò)增效率,。此外,如果引物的退火和延伸溫度相差無(wú)幾,,則可將它們合并為一步,,以進(jìn)一步縮短PCR時(shí)間。這一過(guò)程也被稱為 兩步PCR法,。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定和病原微生物,,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定,,是在同一PCR反應(yīng)管中同時(shí)加上多種病原微生物的特異性引物,,進(jìn)行PCR擴(kuò)增.可用于同時(shí)檢測(cè)多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。 |
相關(guān)產(chǎn)品:
禽腎炎病毒型PCR檢測(cè)試劑盒 Avian Nephritis Virus 2(ANV2)2RTPCR.捻轉(zhuǎn)血矛線蟲PCR檢測(cè)試劑盒 Haemonchus contortusPCR.斯氏普羅威登斯菌PCR檢測(cè)試劑盒 Providencia stuartiPCR
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,,室溫放置5分鐘使其溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,,15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),,清洗RNA沉淀,。混勻后,,4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),,先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,,使其溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度
小鼠連環(huán)蛋白β1(CTNNβ1)ELISA試劑盒 ,,英文名: CTNNβ1 ELISA Kit
人補(bǔ)體片斷5b(C5b)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanComplemefragme5b,C5bELISAKit 96T/48T
大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子AB(PDGF-AB)免疫試劑盒 Rat Platelet-Derived Growth Factor AB,PDGF-AB ELISA kit
英文名稱RatHistamineELISAKit大鼠組胺(Histamine)規(guī)格:96T/48T
鈣離子膜通道鈣交換體(NCX/線粒體)功能熒光檢測(cè)試劑盒20次
ELISAKitTI人真胰島素規(guī)格:48T/96T
Anti-mu Opioid receptor/FITC 熒光素標(biāo)記μ-型受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-monkey IgM/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗猴IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子8抗體 Anti-CEAcam8/CD67 0.2ml
Rabbit Anti-horse IgM/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml
FAM96B 英文名稱: FAM96B蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh PKN2 蛋白N2抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-monkey IgM/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗猴IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
黃熱病病毒PCR檢測(cè)試劑盒TSLP(Human thymic stromal lymphopoietin) ELISA Kit 人胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-GABABR1 gamma氨基B型受體1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgG 規(guī)格 0.1ml
MSTN(rat Myostatin) ELISA Kit 大鼠肌抑素 ELISA 試劑盒 96T
SP-B 英文名稱: 肺表面活性蛋白B抗體 0.1ml
CHURC1 英文名稱: 神經(jīng)誘導(dǎo)胚胎發(fā)育相關(guān)蛋白Churchill抗體 0.2ml
Anti-GABABR1 gamma氨基B型受體1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例),。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分),。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,,分別為 7,6,,5,,4,3,,2,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,,下同),。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
4. 換槍頭,,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
5. 換槍頭,,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二,、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品,,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管,。
三,、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),,6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),,1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照,。