PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱:西部馬腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑盒
英文名稱:Western Equine Encephalomyelitis Virus(WEEV )RTPCR
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融,。
運(yùn)輸:低溫、避光,,快遞免費(fèi)送貨上門,。
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相關(guān)產(chǎn)品:
同豬皰疹病毒Ⅰ型奧葉茲基氏病病毒PCR檢測試劑盒 Aujeszky's Disease Virus(ADV,Ⅰ)PCR.血球鏈菌PCR檢測試劑盒 Globicatella sanguinisPCR.巨睪前殖吸蟲PCR檢測試劑盒 Prosthogonimus macrorchisPCR
實(shí)驗(yàn)過程:
一,、試劑準(zhǔn)備 | 二,、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,,而不能從無到有,,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,??梢允?span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP,、dCTP,、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)???1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油,。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴(kuò)增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存,。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油,;否則,直接取5-10μl電泳檢測,。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A,、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 ,。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,以免變質(zhì),。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存,。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
小鼠賴酰氧化酶樣蛋白1(LOXL1)ELISA試劑盒 ,,英文名: LOXL1 ELISA Kit
人鳥脫羧酶(ODC)ELISA檢測試劑盒HumanOrnithinedecarboxylase,ODCELISAKit 96T/48T
大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)免疫試劑盒 Rat platelet membrane glycoprotein ⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢa ELISA Kit
英文名稱RatGlycoprotein96ELISAKit大鼠腫瘤排斥性抗原gp96(gp96)規(guī)格:96T/48T
鈣轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌制備試劑盒1次
ELISAKitApo-E人載脂蛋白E規(guī)格:48T/96T
Anti-PI3 Kinase p110 delta/FITC 熒光素標(biāo)記0脂酰肌醇催化亞單位D抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgG-Fc 兔抗小鼠IgG-Fc (親和層析化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
G蛋白偶合受體1抗體 Anti-GRK1 0.2ml
Mouse Anti-Bov IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗IgG 0.1ml
FRMD3 英文名稱: FRMD3蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-SEK1/MKK4 (Thr261) 0酸化原活化蛋白4抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-mouse IgG-Fc 兔抗小鼠IgG-Fc (親和層析化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
西部馬腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑盒PARC/CCL18(Human pulmonary activation regulated chemokine) ELISA Kit 人肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-phospho-FOXO4 (Ser197) 0酸化叉頭蛋白4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgM/FITC FITC標(biāo)記的小鼠抗人IgM 規(guī)格 0.1ml
C/EBP Alpha(Human CCAAT/enhancer binding protein alpha) ELISA Kit 人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α 96T
SPOCK2 英文名稱: 蛋白聚糖2抗體 0.2ml
capsid protein 英文名稱: 豬圓環(huán)病毒Ⅱ型衣殼蛋白 0.2ml
Anti-phospho-FOXO4 (Ser197) 0酸化叉頭蛋白4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。