詳細介紹
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產品屬性:
產品名稱:傳染性膿皰病毒PCR檢測試劑盒
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融,。
運輸:低溫,、避光,快遞免費送貨上門,。
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實驗過程:
一,、試劑準備 | 二、操作步驟 |
1. DNA模板 | 1.在冰浴中,,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 |
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min,。
3.結束反應,,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,,以除去石蠟油;否則,,直接取5-10μl電泳檢測,。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,。
④底物A應揮發(fā),,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,,避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值,。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 ,。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,,密封保存,以免變質,。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,,不可保存,。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質前使用,。
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儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉離心30 分鐘取上清,。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,,凍存于-20℃,,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。