詳細(xì)介紹
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,!
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 規(guī)格 |
單增李斯特菌PCR檢測(cè)試劑盒 | PCR檢測(cè)試劑盒 | 50T |
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),,請(qǐng)按一次用量分裝,,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
定量PCR方法:
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個(gè)探針,在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),,這個(gè)時(shí)候,,兩個(gè)平衡不發(fā)光,但是當(dāng)DNA通過引物合成的時(shí)候,,探針被折斷,,釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),兩個(gè)距離較遠(yuǎn),,發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光,,被機(jī)器收集到信號(hào),,從而檢測(cè)基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合,當(dāng)PCR擴(kuò)增的時(shí)候,,染料結(jié)合到DNA上,,從而發(fā)光,單個(gè)的染料不發(fā)光,,這樣就能收集到信號(hào),,我們可以看出,染料法特異性不強(qiáng),,只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光,。 | 在快速PCR中,通過縮減PCR步驟所需時(shí)間來完成更快的擴(kuò)增,,且不會(huì)影響擴(kuò)增產(chǎn)量和效率??焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴(kuò)增能力的DNA聚合酶,,這類聚合酶在每個(gè)結(jié)合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時(shí)間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時(shí)間的1/2至1/3,,卻能維持較高的擴(kuò)增效率,。此外,如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,,則可將它們合并為一步,,以進(jìn)一步縮短PCR時(shí)間。這一過程也被稱為 兩步PCR法,。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定和病原微生物,,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定,,是在同一PCR反應(yīng)管中同時(shí)加上多種病原微生物的特異性引物,,進(jìn)行PCR擴(kuò)增.可用于同時(shí)檢測(cè)多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。 |
相關(guān)產(chǎn)品:
皮炎芽生菌PCR檢測(cè)試劑盒 Blastomyces dermatitidisPCR.人免疫缺陷病毒型通用PCR檢測(cè)試劑盒 Human Immunodeficiency Virus 1(HIV1)IRTPCR.腸道沙門氏菌PCR檢測(cè)試劑盒 Salmonella entericaPCR
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,,室溫放置5分鐘使其溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,,于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),,清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,,使其溶解,,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度
小鼠膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2)ELISA試劑盒 ,,英文名: ANXA2 ELISA Kit
人胸腺依賴性抗原(TD-Ag)ELISA檢測(cè)試劑盒Humahymus-dependeaigen,TD-AgELISAKit 96T/48T
大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)免疫試劑盒 Rat Insulin-like growth factor binding protein 1,IGFBP-1 ELISA Kit
英文名稱Human17-KSELISAKIT人17-同皮質(zhì)類固醇(17-KS)規(guī)格:96T/48T
糞便傷(SalmonellaTyphi)定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20次
ELISAKitAIL-R4人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4規(guī)格:48T/96T
Anti-Phospho-Rb (Ser807/Ser811)/FITC 熒光素標(biāo)記0酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Guinea IgM Whole serum 兔抗豚鼠IgM抗血清Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml
KB抑制蛋白α抗體 Anti-IKB α 0.2ml
Goat anti-Bovine IgG whole serum 羊抗IgG抗血清 1ml
FAM134B 英文名稱: FAM134B蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-PTPRA(Ser180) 0酸化酪0酸酶α抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-Guinea IgM Whole serum 兔抗豚鼠IgM抗血清Multi-class antibodies規(guī)格: 1ml
單增李斯特菌PCR檢測(cè)試劑盒N-Cad(Human Neural-Cadherin) ELISA kit 人N鈣黏蛋白/神經(jīng)鈣黏蛋白Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Phospho-FHIT (Tyr114) 0酸化脆性組三聯(lián)體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗人IgM 規(guī)格 0.1ml
MR(Human mannose receptor) ELISA Kit 人甘露糖受體 96T
SLITRK2 英文名稱: 神經(jīng)突觸相關(guān)蛋白SLITRK2抗體 0.2ml
E cadherin 英文名稱: 上皮鈣粘附分子抗體 0.1ml
Anti-Phospho-FHIT (Tyr114) 0酸化脆性組三聯(lián)體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
使用方法
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,,分別為 7,,6,5,,4,,3,2,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,,*用帶芯槍頭,,下同),。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽性對(duì)照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
4. 換槍頭,,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
二,、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,,多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管,。
三,、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),,6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),1 個(gè)用于PCR 陽性對(duì)照,。