詳細(xì)介紹
使用方法
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例),。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分),。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,,分別為 7,6,,5,,4,3,,2,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,,試劑盒提供),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
5. 換槍頭,,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
二,、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8. 如果有 N 個樣品,,則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管,、另一個用作樣品制備陰性對照管,。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),,6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,,并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),,1 個用于PCR 陽性對照。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,!
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 規(guī)格 |
呼吸道合胞病毒A組PCR檢測試劑盒 | PCR檢測試劑盒 | 50T |
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
定量PCR方法:
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個探針,在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),,這個時候,,兩個平衡不發(fā)光,但是當(dāng)DNA通過引物合成的時候,,探針被折斷,,釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),兩個距離較遠(yuǎn),,發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光,,被機器收集到信號,從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合,,當(dāng)PCR擴增的時候,,染料結(jié)合到DNA上,從而發(fā)光,,單個的染料不發(fā)光,,這樣就能收集到信號,我們可以看出,,染料法特異性不強,,只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光。 | 在快速PCR中,,通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴增,,且不會影響擴增產(chǎn)量和效率??焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴增能力的DNA聚合酶,,這類聚合酶在每個結(jié)合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時間的1/2至1/3,,卻能維持較高的擴增效率,。此外,如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,,則可將它們合并為一步,以進(jìn)一步縮短PCR時間,。這一過程也被稱為 兩步PCR法,。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定和病原微生物,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定,。多種病原微生物的同時檢測或鑒定,,是在同一PCR反應(yīng)管中同時加上多種病原微生物的特異性引物,進(jìn)行PCR擴增.可用于同時檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染,。 |
相關(guān)產(chǎn)品:
田鼠布魯氏菌PCR檢測試劑盒 Brucella microtiPCR.乳酸乳球菌PCR檢測試劑盒 Lactococcus lactis PCR.葡萄狀穗霉屬通用PCR檢測試劑盒 Stachybotrys spp.PCR
PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,,室溫放置5分鐘使其溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋,。手動劇烈振蕩管體15秒后,,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀,?;靹蚝螅?span>4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,,使其溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,,測定RNA溶液 濃度和純度
小鼠鳥苷酸環(huán)化酶激活因子2A(GUCA2A)ELISA試劑盒 ,,英文名: GUCA2A ELISA Kit
人流行性乙型腦炎抗體IgG(JEIgG)ELISA檢測試劑盒HumanJapaneseEncephalitisIgG,JEIgGELISAKit 96T/48T
大鼠硬脂酰去飽和酶1(SCD1)免疫試劑盒 Rat Acyl-CoA desaturase 1,Scd1/Scd ELISA kit
英文名稱HumanCCL26ELISAKit人CCL26規(guī)格:96T/48T
發(fā)酵液三醇比色法定量檢測試劑盒20次
ELISAKitLTBP2人組織內(nèi)轉(zhuǎn)化生長因子β結(jié)合蛋白2規(guī)格:48T/96T
Anti-PDGF-R-A/FITC 熒光素標(biāo)記血小板源性生長因子受體-A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-bov IgG/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
精神分裂癥易感基因抗體 Anti-DTNBP1 1ml
Rabbit Anti-horse IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml
FBXL21 英文名稱: FBXL21蛋白抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-TOPO II Alpha (Ser1106) 0酸化DNA拓普西異構(gòu)酶Ⅱ抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-bov IgG/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
呼吸道合胞病毒A組PCR檢測試劑盒大鼠5核苷酸酶(5-)ELISA試劑盒 ,英文名: 5- ELISA Kit
Mouse maix metalloproteinase 9/ gelatinase B (MMP-9/Gelatinase B) ELISA Kit 小鼠基質(zhì)金屬9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B)ELISA試劑盒
MousePepsinELISAKit 小鼠胃(Pepsin)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumaesistinELISAKIT人抵抗素規(guī)格:48T/96T
通用型豬丹毒(SeMr)試劑盒20次
ELISAKitUK大鼠尿規(guī)格:48T/96T