PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱:古典豬瘟病毒PCR檢測(cè)試劑盒
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫,、避光,,快遞免費(fèi)送貨上門。

相關(guān)產(chǎn)品:
牛病毒性腹瀉病毒型PCR檢測(cè)試劑盒 Bovine Viral Diarrhea Virus 2 (BVDV2)2RTPCR.產(chǎn)氣克雷伯氏菌PCR檢測(cè)試劑盒 Klebsiella aerogenesPCR.辛德畢斯病毒PCR檢測(cè)試劑盒 Sindbis Virus(SINV)RTPCR
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一,、試劑準(zhǔn)備 | 二,、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,,而不能從無(wú)到有,,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允?span>DNA也可以是RNA,,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP,、dCTP,、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中,。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)???1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油,。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴(kuò)增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存,。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油,;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè),。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子,。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸,,有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A,、B液時(shí),,避免使用帶金屬部分的加樣器 ,。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質(zhì),。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,,不可保存,。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。
小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲酸抑制因子(Vaspin)ELISA試劑盒 ,,英文名: Vaspin ELISA Kit
人酚(PYD)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanPyridinoline,PYDELISAKit 96T/48T
大鼠抑瘤素M(OSM)免疫試劑盒 Rat oncostatin M,OSM ELISA kit
英文名稱HumanCCL17ELISAKit人CCL17規(guī)格:96T/48T
非同位素AP化學(xué)發(fā)光法DNA斑點(diǎn)雜交試劑盒5次
ELISAKithiston-H2b人組蛋白H2b規(guī)格:48T/96T
Anti-phospho C-Myc(pThr58/pSer62)/FITC 熒光素標(biāo)記抗0酸化致癌基因C-Myc抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Bovine IgM 兔抗IgM (親和層析化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
生長(zhǎng)激素受體抗體 Anti-GHR 0.1ml
Rabbit Anti-chicken IgG/FITC FITC標(biāo)記的兔抗雞IgG 0.3ml
FABP4 英文名稱: 脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-SLK/FYN (Tyr530) 0酸化酪蛋白Fyn/同步原癌基因抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-Bovine IgM 兔抗IgM (親和層析化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
古典豬瘟病毒PCR檢測(cè)試劑盒大鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA試劑盒 ,,英文名: AFU ELISA Kit
Mouse monocyte chemotactic protein 2 (MCP-2/CCL8) ELISA Kit 小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA試劑盒
ELISA 小鼠Pleioophin(mouse Pleioophin) 48T/96T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforIGFBP-4(Humaninsulin-likegrowthfactorsbindingprotein4)ELISAKit人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4規(guī)格:48T/96T
通用型牛鉤端(L.hardjo)試劑盒20次
ELISAKitPAI-1大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1規(guī)格:48T/96T
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),,請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。