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PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中,，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
產品屬性：
產品名稱：犬細小病毒PCR檢測試劑盒

規(guī)格：50T
分類：PCR檢測試劑盒
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融,。
運輸：低溫,、避光，快遞免費送貨上門,。

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實驗過程：

2．調整好反應程序,。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增,。一般：在93℃預變性3-5min,，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次,，zui后在72℃ 保溫7min,。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存,。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油,，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,，以除去石蠟油；否則,，直接取5-10μl電泳檢測,。

注意事項：
①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,。
④底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值,。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器 ,。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質,。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質前使用。

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儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激,，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃，避免反復凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍