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詳細(xì)介紹
使用方法
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7,，6,，5，4,，3,，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,，*用帶芯槍頭,，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL,，試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
4. 換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
5. 換槍頭,，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
二,、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8. 如果有 N 個樣品,，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管,、另一個用作樣品制備陰性對照管,。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系,，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,，并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，1 個用于PCR 陽性對照。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,！
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 規(guī)格 |
人Nucleostemin基因PCR檢測試劑盒 | PCR檢測試劑盒 | 50T |
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
定量PCR方法：
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個探針,，在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團和淬滅集團,，這個時候，兩個平衡不發(fā)光,，但是當(dāng)DNA通過引物合成的時候,，探針被折斷，釋放出發(fā)光集團和淬滅集團,，兩個距離較遠(yuǎn),，發(fā)光集團產(chǎn)生熒光，被機器收集到信號,，從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合,，當(dāng)PCR擴增的時候，染料結(jié)合到DNA上,，從而發(fā)光,，單個的染料不發(fā)光，這樣就能收集到信號,，我們可以看出,，染料法特異性不強，只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光,。 | 在快速PCR中,，通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴增，且不會影響擴增產(chǎn)量和效率,?？焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴增能力的DNA聚合酶，這類聚合酶在每個結(jié)合中可引入更多的核苷酸,。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時間的1/2至1/3,，卻能維持較高的擴增效率。此外,，如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,，則可將它們合并為一步,，以進一步縮短PCR時間。這一過程也被稱為 兩步PCR法,。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定和病原微生物,，某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時檢測或鑒定,，是在同一PCR反應(yīng)管中同時加上多種病原微生物的特異性引物,，進行PCR擴增.可用于同時檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。 |
相關(guān)產(chǎn)品：
革蜱PCR檢測試劑盒 Dermacenter spp.PCR.內(nèi)羅畢羊病病毒PCR檢測試劑盒 Nairobi Sheep Disease Virus(NSDV)RTPCR.痘苗病毒PCR檢測試劑盒 Vaccinia Virus(VV)PCR
PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞,，室溫放置5分鐘使其溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋,。手動劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀,?；靹蚝螅?span>4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,，使其溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度
小鼠熱休克蛋白40(Hsp-40)ELISA試劑盒 ,，英文名： Hsp-40 ELISA Kit
小鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢ)ELISA檢測試劑盒MouseprocollagenⅢN-terminalpeptide,PⅢELISAKit 96T/48T
人鈣聯(lián)蛋白(calnexin)免疫試劑盒 Human calnexin ELISA Kit
RatIerferonγ,IFN-γELISAKit大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
CASPASE-1蛋白免疫共沉淀分析試劑盒5次
Mouselipoproteinα,Lp-αELISA試劑盒小鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Anti-p53BP1/53BP1/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人,、大、小鼠p53結(jié)合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Mouse Anti-Goat IgM/ Biotin 化小鼠抗羊IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml
C-藻藍(lán)素/藻藍(lán)蛋白抗體 Anti-C-PC 0.1ml
Rabbit Anti-pig IgG/Bio 標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1ml
FARSLA/CML33 英文名稱： 慢性粒細(xì)胞白血病33抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh PI3 Kinase p110 delta 0脂酰肌醇催化亞單位D抗體 規(guī)格 0.1ml
Mouse Anti-Goat IgM/ Biotin 化小鼠抗羊IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml
人Nucleostemin基因PCR檢測試劑盒大鼠糖蛋白A33(GPA33)ELISA試劑盒 ,，英文名： GPA33 ELISA Kit
Mouse glucoprotein 130 (gp130) ELISA Kit 小鼠糖蛋白130(gp130)ELISA試劑盒
RatEsadiol,E2ELISAKit 大鼠雌二醇(E2)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHLE(Humanleukocyteexastase)ELISAKit人白細(xì)胞彈性規(guī)格：48T/96T
細(xì)胞PKC活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitCNP大鼠C型尿肽規(guī)格：48T/96T
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