化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
使用方法
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）,。由于標準品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。
1. 標記 6 個離心管,，分別為 7，6,，5,，4，3,，2,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭,，下同）,。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用,。
4. 換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用。
5. 換槍頭,，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用,。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用,。
二,、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8. 如果有 N 個樣品,，則需要進行 N+2 個樣品提取,，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管,。
三,、設(shè)置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,，則標記 N+9 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，6 個用于標準曲線,。如果做定性分析,，并且只做 1 次重復,，則標記 N+4 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照,。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,！
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 規(guī)格 |
溶血性鏈球菌熒光PCR檢測試劑盒 | PCR檢測試劑盒 | 50T |
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激,，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃，避免反復凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
定量PCR方法：
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個探針，在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團和淬滅集團,，這個時候,，兩個平衡不發(fā)光，但是當DNA通過引物合成的時候,，探針被折斷,，釋放出發(fā)光集團和淬滅集團,，兩個距離較遠，發(fā)光集團產(chǎn)生熒光,，被機器收集到信號,，從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合，當PCR擴增的時候,，染料結(jié)合到DNA上,，從而發(fā)光，單個的染料不發(fā)光,，這樣就能收集到信號,，我們可以看出，染料法特異性不強,，只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光,。 | 在快速PCR中，通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴增,，且不會影響擴增產(chǎn)量和效率,。快速循環(huán)條件尤其適用于具有高擴增能力的DNA聚合酶,，這類聚合酶在每個結(jié)合中可引入更多的核苷酸,。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時間的1/2至1/3，卻能維持較高的擴增效率,。此外,，如果引物的退火和延伸溫度相差無幾，則可將它們合并為一步,，以進一步縮短PCR時間,。這一過程也被稱為 兩步PCR法。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定和病原微生物,，某些遺傳病及癌基因的分型鑒定,。多種病原微生物的同時檢測或鑒定，是在同一PCR反應管中同時加上多種病原微生物的特異性引物,，進行PCR擴增.可用于同時檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染,。 |
相關(guān)產(chǎn)品：
嚙蝕艾肯菌PCR檢測試劑盒 Eikenella corrodensPCR.克氏食道線蟲PCR檢測試劑盒 Oesophagostomum clumbianumPCR.黃頭病毒PCR檢測試劑盒 Yellow Head Virus(YHV)RTPCR
PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀,。混勻后,，4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,，測定RNA溶液 濃度和純度
小鼠神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2(G2)ELISA試劑盒 ，英文名： G2 ELISA Kit
小鼠壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體4(AIL-R4)ELISA檢測試劑盒Mousetumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand4,AILR4ELISAKit 96T/48T
人肝X受體β(LXRβ)免疫試劑盒 Human Liver X Receptor β,LXRβ ELISA Kit
RatHyaluronicacid,HAELISAKit大鼠透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Bradford大量蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒50次
MouseIerleukin4,IL-4ELISA試劑盒小鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Anti-RELN(Reelin)/FITC 熒光素標記絡(luò)絲蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
MBP (Myelin Basic Protein, Rat)peptide 髓鞘堿性蛋白(多肽)大鼠Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
毒蕈堿型乙酰受體M1抗體 Anti-ChRM1 0.1ml
SDHB 英文名稱： 鉻細胞瘤患者抑癌基因SDHB抗體 0.1ml
FAM98B 英文名稱： FAM98B蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-PKC beta 1/2(Thr500) 0酸化蛋白C β1/β2(Thr500)抗體 規(guī)格 0.1ml
MBP (Myelin Basic Protein, Rat)peptide 髓鞘堿性蛋白(多肽)大鼠Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
溶血性鏈球菌熒光PCR檢測試劑盒大鼠細胞因子信號轉(zhuǎn)導抑制因子2(SOCS2)ELISA試劑盒 ,，英文名： SOCS2 ELISA Kit
Mouse epithelial neuophil activating peptide 78 (ENA-78/CXCL5) ELISA Kit 小鼠上皮中性粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑盒
MouseCarboxyterminalpropeptideoftypeⅠprocollagen,PⅠCPELISAKit 小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HSV-IIgM單皰疹Ⅰ型病毒IgM(捕獲法一步法)
細胞IRAK1活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitLTB4大鼠白三烯B4規(guī)格：48T/96T
化工儀器網(wǎng)