PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱(chēng):山羊關(guān)節(jié)炎腦炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒
規(guī)格:50T
分類(lèi):PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融,。
運(yùn)輸:低溫、避光,,快遞免費(fèi)送貨上門(mén),。
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相關(guān)產(chǎn)品:
產(chǎn)氣腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 Enterobacter aerogenesPCR.奧斯特線蟲(chóng)通用PCR檢測(cè)試劑盒 Ostertagia spp.PCR.腸道病毒組PCR檢測(cè)試劑盒 Enterovirus(EV)ARTPCR
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備 | 二,、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允?span>DNA也可以是RNA,,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP,、dGTP,、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中,。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)???1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,,不加或添加石蠟油。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存,。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油,;否則,,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子,。底物B對(duì)光敏感,,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,,有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A,、B液時(shí),,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存,。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
小鼠生長(zhǎng)激素(GH)ELISA試劑盒 ,,英文名: GH ELISA Kit
小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4(bFGF-4)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousebasicfibroblastgrowthfactor4,bFGF-4ELISAKit 96T/48T
人高爾基蛋白73(GP-73)免疫試劑盒 Human GP-73 ELISA Kit
RatHelicobacterpyloriIgG,Hp-IgGELISAKit大鼠幽門(mén)螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
BJ5183電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌5X100微升
Mouseierferon-inducibleprotein16,IFI16/p16ELISA試劑盒小鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Anti-Phospho-Tie2 (Ser1119) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化血管生成素受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Kir6.2 peptide ATP敏感性通道亞基kir6.2抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
核糖核蛋白抗原SSA抗體 Anti-SSA/RO 0.1ml
SET 英文名稱(chēng): SET易位蛋白/髓系白血病相關(guān)蛋白抗體 0.1ml
EphA2 英文名稱(chēng): 內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪酸抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-MAP3K8/Tpl2 (Thr290) 0酸化原活化蛋白8抗體 規(guī)格 0.1ml
Kir6.2 peptide ATP敏感性通道亞基kir6.2抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
山羊關(guān)節(jié)炎腦炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒大鼠胰腺再生蛋白Ⅳ(REG4)ELISA試劑盒 ,英文名: REG4 ELISA Kit
Mouse endocrine gland vascular endothelial growth factor (EG-VEGF) ELISA Kit 小鼠內(nèi)分泌腺來(lái)源的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒
MouseTumornecrosisfactorsolublereceptorⅠ,TNFsR-ⅠELISAKIT 小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumancytovillin/ezrin,CVLELISAKit人細(xì)胞絨毛蛋白/埃茲蛋白規(guī)格:48T/96T
細(xì)胞ARG/ABL2活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitC4a大鼠過(guò)敏毒素/補(bǔ)體片斷4a規(guī)格:48T/96T
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),,請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍