使用方法
一,、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標記 6 個離心管,,分別為 7,,6,5,,4,,3,2,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,,*用帶芯槍頭,下同),。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用。
4. 換槍頭,,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用,。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用,。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品,。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,,多出的一個用作樣品制備陽性對照管,、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三,、設(shè)置 qPCR 反應(20μL 體系,,在樣品制備室進行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線,。如果做定性分析,,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照,。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 規(guī)格 |
豬腦心肌炎病毒PCR檢測試劑盒 | PCR檢測試劑盒 | 50T |
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儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,,凍存于-20℃,,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
定量PCR方法:
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個探針,,在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團和淬滅集團,這個時候,兩個平衡不發(fā)光,,但是當DNA通過引物合成的時候,,探針被折斷,釋放出發(fā)光集團和淬滅集團,,兩個距離較遠,,發(fā)光集團產(chǎn)生熒光,被機器收集到信號,,從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合,,當PCR擴增的時候,染料結(jié)合到DNA上,,從而發(fā)光,單個的染料不發(fā)光,,這樣就能收集到信號,,我們可以看出,染料法特異性不強,,只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光,。 | 在快速PCR中,通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴增,,且不會影響擴增產(chǎn)量和效率,。快速循環(huán)條件尤其適用于具有高擴增能力的DNA聚合酶,,這類聚合酶在每個結(jié)合中可引入更多的核苷酸,。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時間的1/2至1/3,卻能維持較高的擴增效率,。此外,,如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,則可將它們合并為一步,,以進一步縮短PCR時間,。這一過程也被稱為 兩步PCR法。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定和病原微生物,,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定,。多種病原微生物的同時檢測或鑒定,是在同一PCR反應管中同時加上多種病原微生物的特異性引物,,進行PCR擴增.可用于同時檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染,。 |
相關(guān)產(chǎn)品:
小鼠周期素依賴性抑制因子1A(CDKN1A)PCR檢測試劑盒 ,英文名: CDKN1A
犬A(VA)ELISA檢測試劑盒CanineVitaminA,VAELISAKit 50T
犬透明質(zhì)酸酶1(HAase 1)免疫試劑盒 Canine Hyaluronidase 1,HAase 1
英文名稱HumaumornecrosisfactorβELISAKIT人腫瘤壞死因子β(TNFβ)
超氧化物歧化酶(SOD)細胞裂解樣品制備試劑盒50次
ratgrowthhormonereleasinghormone,
PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,,室溫放置5分鐘使其溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,,15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,,中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,,于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),,清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,,使其溶解,,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度
小鼠糖皮質(zhì)激素受體α(GR-α)ELISA試劑盒 ,,英文名: GR-α ELISA Kit
小鼠層連蛋白/板層素(LN)ELISA檢測試劑盒MouseLaminin,LNELISAkit 96T/48T
人骨鈣素/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒 Human Osteocalcin/Bone gla protein,OT/BGP ELISA kit
ratfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit大鼠促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
ACTIN(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升
MousegranzymesA,Gzms-AELISA試劑盒小鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Anti-NT-4/NT-5 /FITC 熒光素標記神經(jīng)生長因子4/5抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-human IgM/HRP 辣根過氧化物酶標記羊抗人IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
CD5抗體 Anti-CD5 0.1ml
Goat Anti-Bovine IgG/Gold 膠體金標記的羊抗IgG 0.5ml
Factor IX 英文名稱: 9抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Pleckstrin/p47 血小板47蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Goat Anti-human IgM/HRP 辣根過氧化物酶標記羊抗人IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
豬腦心肌炎病毒PCR檢測試劑盒大鼠成纖維細胞生長因子23(FGF-23)ELISA試劑盒 ,,英文名: FGF-23 ELISA Kit
Mouse B cell lymphoma factor 2 (Bcl-2) ELISA Kit 小鼠B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA試劑盒
ELISA 小鼠可溶性白細胞分化抗原40配體(mouse sCD40L) 48T/96T 進口分裝
CLIAKitforLepIgG(HumanLeptospiraIgG)ELISAKit人鉤端IgG規(guī)格:48T/96T
通用型HSV(HERPESSIMPLX)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次
ELISAKitIL-1白介素1規(guī)格:48T/96T