PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱:豬鏈球菌Ⅱ型PCR檢測試劑盒
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融,。
運輸:低溫、避光,,快遞免費送貨上門,。
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相關(guān)產(chǎn)品:
小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)PCR檢測試劑盒 ,英文名: MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ
小鼠抗酸性0酸酶5b(ACP-5b)ELISA檢測試劑盒Mousetarate-resistaacidphosphatase5b,ACP-5bELISAKit 50T
人抗SSA/Ro抗體 免疫試劑盒 Human ai-SSA/Ro aibody
Rat15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISAKit大鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)PCR檢測試劑盒
載玻片細胞IP3R受體蛋白
實驗過程:
一,、試劑準備 | 二,、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,,而不能從無到有,,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允?span>DNA也可以是RNA,,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計,。因此,,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP,、dGTP,、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)???1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,,不加或添加石蠟油。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存,。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油,;否則,直接取5-10μl電泳檢測,。
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水,。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A,、B液時,,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存,。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
小鼠糖化血紅蛋白A1c(A1c)ELISA試劑盒 ,,英文名: A1c ELISA Kit
小鼠白血病抑制因子(LIF)ELISA檢測試劑盒MouseLeukemiainhibitoryfactor,LIFELISAkit 96T/48T
人骨成型蛋白7(BMP-7)免疫試劑盒 Human BMP-7 ELISA Kit
Ratfreechorionicgonadoopin,f-βCGELISAKit大鼠游離β絨毛膜(f-βCG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
AKT蛋白免疫共沉淀分析試劑盒5次
Mousegrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISA試劑盒小鼠生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Anti-PEPT1/FITC 熒光素標記腸道肽轉(zhuǎn)運蛋白1/小肽轉(zhuǎn)運蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-mouse IgG/Gold 金標記羊抗小鼠IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
雌激素受體β 抗體 Anti-ER-β 0.2ml
Rabbit Anti-Goat IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗羊IgM 0.1ml
Phospho-FAK (Tyr407) 英文名稱: 0酸化粘著斑抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-Tau protein(Ser214) 0酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Goat Anti-mouse IgG/Gold 金標記羊抗小鼠IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
豬鏈球菌Ⅱ型PCR檢測試劑盒大鼠白三烯D4(LTD4)ELISA試劑盒 ,英文名: LTD4 ELISA Kit
Mouse beta 2 glycoprotein aibody IgA/G/M (1 beta 2-GP1 IgA/G/M) ELISA Kit 小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA試劑盒
ELISA 小鼠Ghrelin(mouse Ghrelin) 48T/96T 進口分裝
CLIAKitforIRAP(HumanICEprotease-activatingfactor)ELISAKit人ICE激活因子規(guī)格:48T/96T
通用型非變性裂解液適合各種細胞native蛋白
ELISAKitNE大鼠中性粒細胞彈性規(guī)格:48T/96T
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍