使用方法
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分),。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,,分別為 7,6,,5,,4,3,,2,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,,下同)。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽性對(duì)照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,,試劑盒提供),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
5. 換槍頭,,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8. 如果有 N 個(gè)樣品,,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對(duì)照管,、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管,。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),,6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,,并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),,1 個(gè)用于PCR 陽性對(duì)照。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,!
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 規(guī)格 |
豬藍(lán)耳病病毒(高致病性)PCR檢測(cè)試劑盒 | PCR檢測(cè)試劑盒 | 50T |
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儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),,請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
定量PCR方法:
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個(gè)探針,,在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),,這個(gè)時(shí)候,兩個(gè)平衡不發(fā)光,但是當(dāng)DNA通過引物合成的時(shí)候,,探針被折斷,,釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),兩個(gè)距離較遠(yuǎn),,發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光,,被機(jī)器收集到信號(hào),從而檢測(cè)基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合,,當(dāng)PCR擴(kuò)增的時(shí)候,,染料結(jié)合到DNA上,從而發(fā)光,,單個(gè)的染料不發(fā)光,,這樣就能收集到信號(hào),我們可以看出,,染料法特異性不強(qiáng),,只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光。 | 在快速PCR中,,通過縮減PCR步驟所需時(shí)間來完成更快的擴(kuò)增,,且不會(huì)影響擴(kuò)增產(chǎn)量和效率??焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴(kuò)增能力的DNA聚合酶,,這類聚合酶在每個(gè)結(jié)合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時(shí)間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時(shí)間的1/2至1/3,,卻能維持較高的擴(kuò)增效率,。此外,如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,,則可將它們合并為一步,以進(jìn)一步縮短PCR時(shí)間,。這一過程也被稱為 兩步PCR法,。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定和病原微生物,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定,。多種病原微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定,,是在同一PCR反應(yīng)管中同時(shí)加上多種病原微生物的特異性引物,進(jìn)行PCR擴(kuò)增.可用于同時(shí)檢測(cè)多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染,。 |
相關(guān)產(chǎn)品:
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β(TGFβ1)PCR檢測(cè)試劑盒 ,,英文名: TGFβ1
小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISAKit 50T
人抗SS-B/La抗體免疫試劑盒 Human SS-B/La Aibody,
Rabbitα2-Aiplasmin,α2-APELISAKit兔子α2抗纖溶酶(α2-AP)PCR檢測(cè)試劑盒
載玻片細(xì)胞IL蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次
Humanβ-Throm
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,,15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),,清洗RNA沉淀,。混勻后,,4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其溶解,,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度
小鼠糖蛋白130(gp130/CD130)ELISA試劑盒 ,英文名: gp130/CD130 ELISA Kit
牛鋅金屬硫蛋白(Zn-MT)ELISA檢測(cè)試劑盒BovineZn-Metallothionein,Zn-MTELISAKit 96T/48T
人8-羥基DNA糖苷酶(OGG1)免疫試劑盒 Human OGG1 ELISA kit
英文名稱MouseIerleukin-16,,IL-16ELISAKIT小鼠白介素-16(IL-16)規(guī)格:96T/48T
冰凍切片組織CASPASE-3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次
RatcoagulationfactorⅡ,FⅡELISA試劑盒大鼠Ⅱ(FⅡ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Anti-PAK1/FITC 熒光素標(biāo)記p21激活1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Mouse IgM 羊抗小鼠IgM (親和層析化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
促卵泡刺激素受體抗體 anti-FSH-R 0.2ml
Goat Anti-rabbit IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的羊抗兔IgG 0.1ml
Phospho-FLT3 (Tyr599) 英文名稱: 0酸化FMS樣酪酸3抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-STAT1 (Ser727) 0酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體 規(guī)格 0.1ml
Goat Anti-Mouse IgM 羊抗小鼠IgM (親和層析化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
豬藍(lán)耳病病毒(高致病性)PCR檢測(cè)試劑盒大鼠白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA試劑盒 ,,英文名: LIFR ELISA Kit
Mouse beta endorphin (beta -EP) ELISA Kit 小鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒
ELISA 小鼠X(mouse FX) 48T/96T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforiso-Hyd(HumanIsoprenalineHydrochloride)ELISAKit人異規(guī)格:48T/96T
通用型丁酰酯酶活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20次
ELISAKitTNFsR-Ⅰ大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ規(guī)格:48T/96T