PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱:豬高致病性藍(lán)耳病毒RT-PCR檢測試劑盒
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫,、避光,,快遞免費送貨上門。
![5.png 5.png](https://img70.chem17.com/1cba7c2130d463f08d35f6a12b43810171a8d53ded455ad65f700a8bc5f526bc71cc182ed99641ba.png)
相關(guān)產(chǎn)品:
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)PCR檢測試劑盒 ,,英文名: TGF-β1
小鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA檢測試劑盒MouseGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISAKit 50T
人抗TNF-α自身抗體免疫試劑盒 Human ai-TNF-alpha aoaibody
RabbitvonWillebrandFactor,VWFELISAKit兔血管性血友病因子/瑞斯托輔因子(VWF)PCR檢測試劑盒
載玻片細(xì)胞IKB-ALPHA蛋白表達(dá)NBT顯色光
實驗過程:
一,、試劑準(zhǔn)備 | 二、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,,而不能從無到有,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物,。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計,。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP,、dCTP,、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)???1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油,。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存,。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油,;否則,直接取5-10μl電泳檢測,。
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。
④底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,,避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,有毒,。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A,、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 ,。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,以免變質(zhì),。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,,不可保存,。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
小鼠糖蛋白130(gp130)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat leinizing hormone releasing hormone (LHRH) ELISA Kit 大鼠黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISA試劑盒
HumanCytochromeP450c21/21-hydroxylase,CYP21AELISAKit 人細(xì)胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
cit瓜規(guī)格:96T/48T
載玻片細(xì)胞鈣ATP酶PMCA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次
Mouseeosinophilcationicprotein,ECPELISAKit小鼠嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白(ECP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Anti-RACK1/FITC 熒光素標(biāo)記受體激活蛋白C1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-mouse IgM/FITC 熒光素標(biāo)記羊抗小鼠IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
多巴胺β羥化酶抗體 Anti-DBH 0.1ml
Rabbit Anti-human IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗人IgG 0.1ml
FDFT1 英文名稱: 法尼基二0酸法尼基轉(zhuǎn)移酶1/鯊烯合成酶抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1387) 0酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體 規(guī)格 0.1ml
Goat Anti-mouse IgM/FITC 熒光素標(biāo)記羊抗小鼠IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
豬高致病性藍(lán)耳病毒RT-PCR檢測試劑盒大鼠白三烯E4(LTE4)ELISA試劑盒 ,英文名: LTE4 ELISA Kit
Mouse beta glucosidase (beta -glucosidase) ELISA Kit 小鼠β葡糖苷酶(β-glucosidase)ELISA試劑盒
ELISA 小鼠胃泌素(mouse Gasin) 48T/96T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforIRF(HumanierferoegulatoryFactor)ELISAKit人干擾素調(diào)節(jié)因子規(guī)格:48T/96T
通用型番茄瘡痂病辣椒斑點病菌(Xahomonascampesispv.vesicatoria;Xcv)試劑盒20次
NGAL大鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白規(guī)格:48T/96T
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍