PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱:豬圓環(huán)病毒PCR檢測試劑盒
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融,。
運(yùn)輸:低溫,、避光,,快遞免費(fèi)送貨上門。

相關(guān)產(chǎn)品:
小鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)PCR檢測試劑盒 ,,英文名: NGAL
小鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA檢測試劑盒MouseSuperOxidaseDimase,SODELISAKit 50T
人軍團(tuán)菌抗體IgM(LP Ab-IgM)免疫試劑盒 Human Legionella aibody IgM,LP Ab-IgM
RatActivatedLeukocyteCellAdhesionMolecule,ALCAMELISAKit大鼠白細(xì)胞活化黏附因子(ALCAM)PCR檢測試劑盒
實驗過程:
一,、試劑準(zhǔn)備 | 二、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,,而不能從無到有,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物,。可以是DNA也可以是RNA,,一般20多bp,,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP,、dCTP、dGTP,、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)???1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,,不加或添加石蠟油,。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min,。
3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油;否則,,直接取5-10μl電泳檢測,。
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A,、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 ,。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,以免變質(zhì),。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。
小鼠糖原合成酶(GSK)ELISA試劑盒 ,,英文名: GSK ELISA Kit
小鼠白介素4(IL-4)ELISA檢測試劑盒MouseIerleukin4,IL-4ELISAKIT 96T/48T
人骨橋素(OPN)免疫試劑盒 Human Osteopoin,OPN ELISA Kit
RatFibronectin,FNELISAKit大鼠纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
96孔板細(xì)胞基因組DNA分離試劑盒10次
MouseGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISA試劑盒小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Anti-PEG10 /FITC 熒光素標(biāo)記肝癌高表達(dá)基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-human IgA/Gold 金標(biāo)記羊抗人IgA(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
原活化蛋白3抗體 Anti-MAPK1/ERK3 0.1ml
Mouse Anti-Goat IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 0.1ml
FBXW5 英文名稱: FBXW5蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-Tau protein(Ser356) 0酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Goat Anti-human IgA/Gold 金標(biāo)記羊抗人IgA(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
豬圓環(huán)病毒PCR檢測試劑盒大鼠顆粒體蛋白(GRN)ELISA試劑盒 ,,英文名: GRN ELISA Kit
Mouse apolipoprotein B100 (apo-B100) ELISA Kit 小鼠載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒
Ratniicoxide,NOELISAKit 大鼠血清(NO)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforFSH(Humanfollicle-stimulatinghormone)ELISAKit人促卵泡素規(guī)格:48T/96T
細(xì)胞還原型(GSH)濃度熒光定量檢測試劑盒50次
RatPlatelet-DerivedGrowthFactorAB,PDGF-ABELISAKit大鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,,請按一次用量分裝,,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍