PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱:麻風(fēng)桿菌(ML)核酸檢測(cè)試劑盒
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫,、避光,,快遞免費(fèi)送貨上門。
相關(guān)產(chǎn)品:
呼吸道合胞病毒PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Respiratory Syncytial Virus(RSV)RTPCR
呼吸道合胞病毒型PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Respiratory Syncytial VirusA(RSVA)ARTPCR
弧菌通用PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Vibrio spp.PCR
滑液支原體PCR檢測(cè)試劑盒 英文名稱; Mycoplasma synoviaePCR
實(shí)驗(yàn)過程:
一,、試劑準(zhǔn)備 | 二,、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,??梢允?span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP,、dCTP,、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)???1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油,。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴(kuò)增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存,。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油,;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè),。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長時(shí)間打開蓋子,。底物B對(duì)光敏感,,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,,有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A,、B液時(shí),,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存,。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
小鼠絲酸轉(zhuǎn)肽酶抑制劑Kazal type 3(SPINK3)ELISA試劑盒 ,,英文名: SPINK3 ELISA Kit
小鼠干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長因子(SCF/MGF)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseStemcellfactor/mastcellgrowthfactor,SCF/MGFELISAkit 96T/48T
人谷[NMDA]受體亞基ε-2(-2)免疫試劑盒 Human -2 ELISA Kit
RatGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISAKit大鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
ATP酶法冰凍切片人體肌肉組織分型染色試劑盒20次
MouseHistoneDeacetylase,HDELISA試劑盒小鼠組織蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Anti-p300/KAT3B/FITC 熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Rabbit IgG/Biotin 化羊抗兔IgG(H+L)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
抗I型膠原抗體 Anti-Collagen I 0.1ml
Mouse Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 0.1ml
Bovine Fibrinogen 英文名稱: 纖維蛋白原抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh PID1 0酸相互作用結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml
Goat Anti-Rabbit IgG/Biotin 化羊抗兔IgG(H+L)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
麻風(fēng)桿菌(ML)核酸檢測(cè)試劑盒大鼠細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)2(ERK2)ELISA試劑盒 ,,英文名: ERK2 ELISA Kit
Mouse nerve growth guidance factor Slit2 ELISA Kit 小鼠神經(jīng)生長導(dǎo)向因子Slit2 ELISA試劑盒
MouseCollageypeⅡ,ColⅡELISAKit 小鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HSV-IIgG單皰疹Ⅰ型病毒IgG(間接法二步法)
細(xì)胞ITK活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitIL-3大鼠白介素3規(guī)格:48T/96T
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),,請(qǐng)按一次用量分裝,,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍