使用方法
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例),。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分),。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,,6,,5,4,,3,,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,,*用帶芯槍頭,,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,,試劑盒提供),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
5. 換槍頭,,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,,多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對照管,、另一個(gè)用作樣品制備陰性對照管。
三,、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),,6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,,并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),,1 個(gè)用于PCR 陽性對照。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,!
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 規(guī)格 |
腸集聚性大腸桿菌(EAEC)核酸檢測試劑盒 | PCR檢測試劑盒 | 50T |
![詳1.png 詳1.png](https://img61.chem17.com/1cba7c2130d463f08d35f6a12b438101298b25a96b13478f1f4df033e2e16833c214936480d915ca.png)
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
定量PCR方法:
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個(gè)探針,,在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),這個(gè)時(shí)候,,兩個(gè)平衡不發(fā)光,,但是當(dāng)DNA通過引物合成的時(shí)候,探針被折斷,,釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),,兩個(gè)距離較遠(yuǎn),發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光,,被機(jī)器收集到信號,,從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合,,當(dāng)PCR擴(kuò)增的時(shí)候,染料結(jié)合到DNA上,,從而發(fā)光,,單個(gè)的染料不發(fā)光,這樣就能收集到信號,,我們可以看出,,染料法特異性不強(qiáng),只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光,。 | 在快速PCR中,,通過縮減PCR步驟所需時(shí)間來完成更快的擴(kuò)增,且不會影響擴(kuò)增產(chǎn)量和效率,??焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴(kuò)增能力的DNA聚合酶,這類聚合酶在每個(gè)結(jié)合中可引入更多的核苷酸,。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時(shí)間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時(shí)間的1/2至1/3,,卻能維持較高的擴(kuò)增效率。此外,,如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,,則可將它們合并為一步,以進(jìn)一步縮短PCR時(shí)間,。這一過程也被稱為 兩步PCR法,。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時(shí)檢測或鑒定和病原微生物,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定,。多種病原微生物的同時(shí)檢測或鑒定,,是在同一PCR反應(yīng)管中同時(shí)加上多種病原微生物的特異性引物,進(jìn)行PCR擴(kuò)增.可用于同時(shí)檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染,。 |
相關(guān)產(chǎn)品:
黃曲霉PCR檢測試劑盒 英文名稱; Aspergillus flavusPCR
黃熱病病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Yellow Fever Virus(YFV)RTPCR
黃熱病病毒疫苗株PCR檢測試劑盒 英文名稱; Yellow Fever Virus( vaccine strain,17D)17D RTPCR
黃頭病毒PCR檢測試劑盒 英文名稱; Yellow Head Virus(YHV)RTPCR
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,,室溫放置5分鐘使其溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,,蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀,?;靹蚝螅?span>4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,,使其溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,,測定RNA溶液 濃度和純度
小鼠絲切蛋白1(CFL1)ELISA試劑盒 ,,英文名: CFL1 ELISA Kit
豬Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢ)ELISA檢測試劑盒PorcineprocollagenⅢN-terminalpeptide,PⅢELISAKit 96T/48T
牛環(huán)0酸腺苷(cAMP)免疫試劑盒 Bovine cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA Kit
牛環(huán)0酸鳥苷(cGMP)免疫試劑盒 Bovine cyclic Guanosine monophosphate,cGMP ELISA Kit
牛核心蛋白聚糖(DCN)免疫試劑盒 Bovine Decorin,DCN ELISA kit
牛過氧化脂質(zhì)(LPO)免疫試劑盒 Bovine lipid peroxide,LPO ELISA kit
牛過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPARG)免疫試劑盒 Bovine peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARG ELISA kit
Anti-P53(wt-p53)/FITC 熒光素標(biāo)記抑制基因抗體(野生型P53)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-rabbit IgG/ Biotin 化小鼠抗兔IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
前列腺素氧化環(huán)化酶1抗體 Anti-COX-1 0.1ml
Mouse Anti-Rabbit IgM/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 0.1ml
FLRT1 英文名稱: 富含亮酸跨膜纖連蛋白1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh PIBF 孕激素誘導(dǎo)阻斷因子抗體 規(guī)格 0.2ml
Mouse Anti-rabbit IgG/ Biotin 化小鼠抗兔IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
腸集聚性大腸桿菌(EAEC)核酸檢測試劑盒大鼠細(xì)胞色素P450氧化還原酶(CPR)ELISA試劑盒 ,英文名: CPR ELISA Kit
Mouse neuron specific enolase (NSE) ELISA Kit 小鼠神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒
Mouseapoprotein,apo-A1ELISAKit 小鼠載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHSP-90(HumanHeatShockProtein90)ELISAKit人熱休克蛋白90規(guī)格:48T/96T
細(xì)胞JNK2活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitIL-2sRα大鼠白介素2可溶性受體α鏈規(guī)格:48T/96T