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詳細(xì)介紹
使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,，分別為 7,，6，5,，4,，3，2,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,，*用帶芯槍頭，下同）,。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL,，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
4. 換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
二,、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品,，則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取,，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管,。
三,、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性分析,，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照,。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
鴿副粘病毒PCR檢測試劑盒 | Pigeon Paramyxovirus（PPMV）RTPCR | 50T |
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
定量PCR方法：
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個探針,，在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán)，這個時候,，兩個平衡不發(fā)光,，但是當(dāng)DNA通過引物合成的時候，探針被折斷,，釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),，兩個距離較遠(yuǎn)，發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光,，被機器收集到信號,，從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合，當(dāng)PCR擴增的時候,，染料結(jié)合到DNA上,，從而發(fā)光,，單個的染料不發(fā)光,，這樣就能收集到信號,，我們可以看出，染料法特異性不強,，只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光,。 | 在快速PCR中，通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴增,，且不會影響擴增產(chǎn)量和效率,。快速循環(huán)條件尤其適用于具有高擴增能力的DNA聚合酶,，這類聚合酶在每個結(jié)合中可引入更多的核苷酸,。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時間的1/2至1/3，卻能維持較高的擴增效率,。此外,，如果引物的退火和延伸溫度相差無幾，則可將它們合并為一步,，以進(jìn)一步縮短PCR時間,。這一過程也被稱為 兩步PCR法。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定和病原微生物,，某些遺傳病及癌基因的分型鑒定,。多種病原微生物的同時檢測或鑒定，是在同一PCR反應(yīng)管中同時加上多種病原微生物的特異性引物,，進(jìn)行PCR擴增.可用于同時檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染,。 |
相關(guān)產(chǎn)品：
西方蜜蜂微孢子蟲PCR檢測試劑盒
東方蜜蜂微孢子蟲PCR檢測試劑盒
蜜蜂微孢子蟲通用PCR檢測試劑盒
核型多角體病毒PCR檢測試劑盒
PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,，中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后,，于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),，清洗RNA沉淀,。混勻后,，4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其溶解,，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,，測定RNA溶液 濃度和純度
SRPK2： 絲酸/蘇酸蛋白SRPK2抗體 0.2ml
Phospho-HER2 (Tyr1139)： 0酸化HER2受體抗體 0.1ml
5-羥色胺受體3抗體 Anti-5-HTR3 0.1ml
Anti-Brucella /HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗羊、,、豬,、人布氏桿菌抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-FRA1(Ser265) 0酸化FRA-1蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
C-Mer/MERTK (proto-oncogene tyrosine kinase) c-mer原癌基因酪抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
小鼠趨化因子(CC基序)配體2(MRC2)ELISA試劑盒 ，英文名： MRC2 ELISA Kit
小鼠腦素/腦尿肽(BNP)ELISA檢測試劑盒Mousebrainnaiureticpeptide,BNPELISAKit 96T/48T
人鈣2(M/II)大亞基(CAPN2)(CAPN2)免疫試劑盒 Human CAPN2 ELISA kit
RatIerleukin17,IL-17ELISAKit大鼠白介素17(IL-17)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
CASPASE-7蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒25次
MouseMacrophageColony-StimulatingFactor,M-CSFELISA試劑盒小鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
鴿副粘病毒PCR檢測試劑盒DA 人多巴胺Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-Cyclin C 周期素C抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh NF-κB p105/p50(Phospho-Ser373) 0酸化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體 規(guī)格 0.1ml
Human Linker for activation of T cell,LAT ELISA Kit 人T細(xì)胞活化連接蛋白 96T
TNF alpha 英文名稱： 壞死因子-α/TNFα抗體 0.1ml
Claudin 15 英文名稱： 緊密連接蛋白15抗體 0.1ml
Anti-Cyclin C 周期素C抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
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