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脊髓灰質(zhì)炎病毒型PCR檢測(cè)試劑盒

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更新時(shí)間:2023-03-20 08:45:28瀏覽次數(shù):249

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 用于科研
英文名稱 Poliovirus 3 (PV3)3RTPCR 儲(chǔ)存條件 -20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融
分類 PCR檢測(cè)試劑盒    
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犬新孢子蟲探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

詳細(xì)介紹

特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,!

產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

脊髓灰質(zhì)炎病毒型PCR檢測(cè)試劑盒

Poliovirus 3 (PV3)3RTPCR

50T

儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14或-20樣品收集,、處理及保存方法
1.
血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2.
血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3.
細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4.
組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5.
保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),,請(qǐng)按一次用量分裝,,凍存于-20
,,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

詳1.png

定量PCR方法:

熒光定量PCR探針?lè)?/span>

熒光定量PCR SYBR Green染料法

快速PCR

多重 PCR

探針?lè)闯艘锿饬硗庠O(shè)置一個(gè)探針,,在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),這個(gè)時(shí)候,,兩個(gè)平衡不發(fā)光,,但是當(dāng)DNA通過(guò)引物合成的時(shí)候,探針被折斷,,釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),,兩個(gè)距離較遠(yuǎn),發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光,,被機(jī)器收集到信號(hào),,從而檢測(cè)基因的量

染料能夠與雙鏈結(jié)合,當(dāng)PCR擴(kuò)增的時(shí)候,,染料結(jié)合到DNA上,,從而發(fā)光,單個(gè)的染料不發(fā)光,,這樣就能收集到信號(hào),,我們可以看出,染料法特異性不強(qiáng),,只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光,。

在快速PCR中,通過(guò)縮減PCR步驟所需時(shí)間來(lái)完成更快的擴(kuò)增,,且不會(huì)影響擴(kuò)增產(chǎn)量和效率,。快速循環(huán)條件尤其適用于具有高擴(kuò)增能力的DNA聚合酶,,這類聚合酶在每個(gè)結(jié)合中可引入更多的核苷酸,。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時(shí)間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時(shí)間的1/21/3,卻能維持較高的擴(kuò)增效率,。此外,,如果引物的退火和延伸溫度相差無(wú)幾,則可將它們合并為一步,,以進(jìn)一步縮短PCR時(shí)間,。這一過(guò)程也被稱為 兩步PCR法。

多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定和病原微生物,,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定,。多種病原微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定,是在同一PCR反應(yīng)管中同時(shí)加上多種病原微生物的特異性引物,,進(jìn)行PCR擴(kuò)增.可用于同時(shí)檢測(cè)多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染,。


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PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
取凍存已裂解的細(xì)胞,,室溫放置5分鐘使其溶解。
兩相分離 每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2mllvfang,,蓋緊管蓋,。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,1530孵育23分鐘,。412000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%
RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,,混勻后1530孵育10分鐘后,于412000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),,清洗RNA沉淀,。混勻后,,47000rpm離心5分鐘。
RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,,使其溶解,,獲得的RNA溶液保存于-80待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,,讀取其在分光光度計(jì)260nm280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度
SSX8
: 滑膜肉瘤X斷點(diǎn)蛋白8抗體 0.1ml

Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser118) 0酸化雌激素受體α抗體 0.1ml

三碘甲狀腺素T3抗體 Anti-T3 0.2ml

Anti-TIMP-4/FITC 熒光素標(biāo)記金屬組織抑制因子-4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-LRP5(Thr1492) 0酸化低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5抗體 規(guī)格 0.1ml

NOS-2 (iNOS) Nitric Oxide Synthase,Inducible 合成酶-2(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
小鼠羥甲基戊二酸單酰還原酶(HMG-CoAR)ELISA試劑盒 ,,英文名: HMG-CoAR ELISA Kit

小鼠免疫球蛋白M(IgM)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseImmunoglobulinM,IgMELISAKit 96T/48T

人富組蛋白(histatin-5)免疫試劑盒 Human histatin 5 ELISA Kit

RatIerleukin1α,IL-1αELISAKit大鼠白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

CASPASE-8蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒25

MouseMacrophageInflammatoryProtein1δ,MIP-1δELISA試劑盒小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
脊髓灰質(zhì)炎病毒型PCR檢測(cè)試劑盒OPN(osteopontin) 骨橋蛋白(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg

Anti-CD45RO CD45ROMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

Rhesus antibody Rh p53 (DO-1) 抑制基因p53抗體 規(guī)格 0.2ml

REG4 Kit Human REG4 ELISA配對(duì)抗體 ELISA

TMEM173 英文名稱: 跨膜蛋白173抗體 0.2ml

CCNYL1 英文名稱: 周期素樣Y1抗體 0.2ml

Anti-CD45RO CD45ROMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
使用方法
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1.
標(biāo)記 6 個(gè)離心管,,分別為 7,,6,,54,,3,,2
2.
用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,,*用帶芯槍頭,,下同)。
3.
7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,,試劑盒提供),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
4.
換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
5.
換槍頭,,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
6.
重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
二、樣品 DNA 的制備
7.
用自選方法純化樣品的 DNA,,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8.
如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管,、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三,、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,,在樣品制備室進(jìn)行)
9.
如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,,并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),,1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。


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