詳細(xì)介紹
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
尼氏單孢子蟲PCR檢測試劑盒 | Haplosporidium nelsoniPCR | 50T |
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,,請按一次用量分裝,,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
定量PCR方法:
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個探針,在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團和淬滅集團,,這個時候,,兩個平衡不發(fā)光,,但是當(dāng)DNA通過引物合成的時候,,探針被折斷,釋放出發(fā)光集團和淬滅集團,,兩個距離較遠(yuǎn),,發(fā)光集團產(chǎn)生熒光,被機器收集到信號,,從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合,,當(dāng)PCR擴增的時候,染料結(jié)合到DNA上,從而發(fā)光,,單個的染料不發(fā)光,,這樣就能收集到信號,我們可以看出,,染料法特異性不強,,只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光。 | 在快速PCR中,,通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴增,,且不會影響擴增產(chǎn)量和效率??焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴增能力的DNA聚合酶,,這類聚合酶在每個結(jié)合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時間的1/2至1/3,,卻能維持較高的擴增效率,。此外,如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,,則可將它們合并為一步,,以進(jìn)一步縮短PCR時間。這一過程也被稱為 兩步PCR法,。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定和病原微生物,,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時檢測或鑒定,,是在同一PCR反應(yīng)管中同時加上多種病原微生物的特異性引物,,進(jìn)行PCR擴增.可用于同時檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。 |
相關(guān)產(chǎn)品:
克氏食道線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
馬蘇哈魚病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
羊口瘡病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
恙蟲病東方體探針法熒光定量PCR試劑盒
PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,,室溫放置5分鐘使其溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋,。手動劇烈振蕩管體15秒后,,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,,于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),,清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,,使其溶解,,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度
S100A13: S100A13抗體 0.1ml
E3 ubiquitin ligase: E3泛素連接酶抗體 0.2ml
蛋白質(zhì)0酸酶-2A抗體 Anti-PP-2A 0.2ml
Anti-SUMO/FITC 熒光素標(biāo)記類泛素蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-MSK1(Thr581) 0酸化有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml
Annexin II 膜粘連蛋白-2抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
小鼠細(xì)胞色素P450家族成員7A1(CYP7A1)ELISA試劑盒 ,,英文名: CYP7A1 ELISA Kit
兔子脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA檢測試劑盒Rabbitlipoprotein-associatedphospholipaseA2,Lp-PL-A2ELISAKit 96T/48T
牛血小板活化因子(PAF)免疫試劑盒 Bovine platelet activating factor,PAF ELISA Kit
英文名稱HumansP-selectinELISAKit人可溶性sP-選擇素(sP-selectin)ELISAKit規(guī)格:96T/48T
等電聚焦蛋白電泳(IEF)10倍祛色溶液500毫升
RatNuclearfactor-kappaB,NF-κBELISA試劑盒大鼠核因子κB(NF-κB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
尼氏單孢子蟲PCR檢測試劑盒OLFM1 peptide 嗅球蛋白1多肽抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
Anti-Beta-arrestin 1 β-抑制蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-ASK1(Ser83) 0酸化細(xì)胞凋亡信號調(diào)節(jié)1抗體 規(guī)格 0.1ml
Tubulin-Beta 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝
UQCRFS1 英文名稱: 質(zhì)子梯度調(diào)節(jié)蛋白1抗體 0.2ml
DNMBP 英文名稱: 動力結(jié)合蛋白DNMBP抗體 0.2ml
Anti-Beta-arrestin 1 β-抑制蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
使用方法
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,,分別為 7,,6,5,,4,,3,2,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,,*用帶芯槍頭,下同),。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
4. 換槍頭,,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
二,、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品,,則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取,,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管,。
三,、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),,6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),,1 個用于PCR 陽性對照,。