詳細介紹
使用方法
一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例),。由于標準品濃度非常高,,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分),。
1. 標記 6 個離心管,,分別為 7,6,,5,,4,3,,2,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,,下同),。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用,。
4. 換槍頭,,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用。
5. 換槍頭,,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用,。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用,。
二,、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8. 如果有 N 個樣品,,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管,、另一個用作樣品制備陰性對照管,。
三,、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),,則標記 N+9 個 PCR 管,,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),,6 個用于標準曲線,。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),,則標記 N+4 個 PCR 管,,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),,1 個用于PCR 陽性對照,。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
衣氏放線菌PCR檢測試劑盒 | Actinomyces israeliiPCR | 50T |
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,,請按一次用量分裝,,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
定量PCR方法:
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個探針,,在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團和淬滅集團,,這個時候,兩個平衡不發(fā)光,,但是當DNA通過引物合成的時候,,探針被折斷,釋放出發(fā)光集團和淬滅集團,,兩個距離較遠,,發(fā)光集團產(chǎn)生熒光,,被機器收集到信號,從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合,,當PCR擴增的時候,,染料結(jié)合到DNA上,從而發(fā)光,,單個的染料不發(fā)光,,這樣就能收集到信號,我們可以看出,,染料法特異性不強,,只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光。 | 在快速PCR中,,通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴增,,且不會影響擴增產(chǎn)量和效率??焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴增能力的DNA聚合酶,,這類聚合酶在每個結(jié)合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時間的1/2至1/3,,卻能維持較高的擴增效率,。此外,如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,,則可將它們合并為一步,,以進一步縮短PCR時間。這一過程也被稱為 兩步PCR法,。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定和病原微生物,,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時檢測或鑒定,,是在同一PCR反應(yīng)管中同時加上多種病原微生物的特異性引物,,進行PCR擴增.可用于同時檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。 |
相關(guān)產(chǎn)品:
腸球菌通用PCR檢測試劑盒
蝦肝腸微胞蟲PCR檢測試劑盒
腸出血性大腸桿菌血清型PCR檢測試劑盒
腸出血性大腸桿菌PCR檢測試劑盒
PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,,室溫放置5分鐘使其溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋,。手動劇烈振蕩管體15秒后,,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,,于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),,清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,,使其溶解,,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度
Dog IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗犬IgM抗體 0.1ml
FAM113A: FAM113A蛋白抗體 0.2ml
人基因/bri3結(jié)合蛋白抗體 Anti-HCCR-1 0.1ml
Anti-Phospho-PKC gamma (Thr674) /FITC 熒光素標記0酸化蛋白C亞型G抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-RPS6KB1(Ser441+Thr444) 0酸化核糖體S6蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-Human IgG(monoclonal antibody) 鼠抗人IgG單克隆抗體 (親和層析化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
小鼠組織D(CTSD)ELISA試劑盒 ,,英文名: CTSD ELISA Kit
綿羊白介素2(IL-2)ELISA檢測試劑盒SheepIerleukin2,IL-2ELISAKit 96T/48T
犬胰島素受體β(ISR-β)免疫試劑盒 Canine Insulin Receptor β,ISR-β ELISA KIT
英文名稱Mouse8-iso-ProstaglandinF2aELISAKIT小鼠8-異前列腺素F2α(8-ISOPGF2a)規(guī)格:96T/48T
不溶性GST融合蛋白溶解試劑盒10次
ratfollicle-stimulatinghormone,FSHELISA試劑盒大鼠促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
衣氏放線菌PCR檢測試劑盒1,2-Benzanthraquinone 2498-66-0 中文名:1,2-苯并奎寧酮 分子式:C18H10O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠孤兒受體配體 英文名稱: Mouse Aemin 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: A
1,2,3-Triacetyl-5-deoxy-D-ribose 62211-93-2 中文名: 分子式:C11H16O7 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠α葡萄糖苷酶 英文名稱: Mouse α Glucosidase 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: AG
1,2,3,6-Tetra-O-galloyl-β-D-glucose 79886-50-3 中文名:1,2,3,6-四-O-沒食子酰-β-D-葡萄糖 分子式:C34H28O22 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠雄激素 英文名稱: Mouse Androgen 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: ADG
1,18-Octadecanediol 3155-43-9 中文名: 分子式:C18H38O2 度:90.0% 關(guān)鍵詞: 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫 ?;趸?span> 英文名稱: Mouse Acyl-CoA oxidase 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: ACO
1-(4-Fluorobenzyl)-2-chlorobenzimidazole 84946-20-3 中文名: 分子式:C14H10ClFN2 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠鉤端IgGelisa試劑盒 小鼠鉤端IgG試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠鉤端IgG試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,,來源:elisa試劑盒(進口分裝),,產(chǎn)品別名:小鼠鉤端IgG試劑盒、小鼠鉤端IgGeisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月,。