詳細(xì)介紹
使用方法
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例),。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分),。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,,6,,5,4,,3,,2,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,,下同),。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
4. 換槍頭,,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
5. 換槍頭,,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
二,、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,,多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對照管,、另一個(gè)用作樣品制備陰性對照管。
三,、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性分析,,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),,1 個(gè)用于PCR 陽性對照。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途,!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
無色桿菌屬通用PCR檢測試劑盒 | Achromobacter spp.PCR | 50T |
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
定量PCR方法:
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個(gè)探針,,在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),,這個(gè)時(shí)候,兩個(gè)平衡不發(fā)光,,但是當(dāng)DNA通過引物合成的時(shí)候,,探針被折斷,釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),,兩個(gè)距離較遠(yuǎn),,發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光,被機(jī)器收集到信號,,從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合,,當(dāng)PCR擴(kuò)增的時(shí)候,染料結(jié)合到DNA上,,從而發(fā)光,,單個(gè)的染料不發(fā)光,這樣就能收集到信號,,我們可以看出,,染料法特異性不強(qiáng),只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光。 | 在快速PCR中,,通過縮減PCR步驟所需時(shí)間來完成更快的擴(kuò)增,,且不會影響擴(kuò)增產(chǎn)量和效率??焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴(kuò)增能力的DNA聚合酶,,這類聚合酶在每個(gè)結(jié)合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時(shí)間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時(shí)間的1/2至1/3,,卻能維持較高的擴(kuò)增效率,。此外,如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,,則可將它們合并為一步,,以進(jìn)一步縮短PCR時(shí)間。這一過程也被稱為 兩步PCR法,。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時(shí)檢測或鑒定和病原微生物,,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時(shí)檢測或鑒定,,是在同一PCR反應(yīng)管中同時(shí)加上多種病原微生物的特異性引物,,進(jìn)行PCR擴(kuò)增.可用于同時(shí)檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。 |
相關(guān)產(chǎn)品:
犬皰疹病毒PCR檢測試劑盒
犬諾瓦克病毒PCR檢測試劑盒
犬副流感病毒PCR檢測試劑盒
平尾毛細(xì)線蟲PCR檢測試劑盒
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,,室溫放置5分鐘使其溶解,。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋,。手動劇烈振蕩管體15秒后,,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%,。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘,。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),,清洗RNA沉淀,。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘,。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,,使其溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零,。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,,測定RNA溶液 濃度和純度
alpha-Synuclein (NT): 核突觸蛋白-α抗體(N端) 0.1ml
FGF10: 成纖維細(xì)胞生長因子10抗體 0.1ml
基質(zhì)金屬-7抗體 Anti-MMP-7 0.1ml
Anti-SARS S-protein/FITC 熒光素標(biāo)記非典病毒表面蛋白S抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-PDGFRA(Tyr849)/PDGFRB(Tyr857) 0酸化血小板源性生長因子受體α/β抗體 規(guī)格 0.1ml
ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Gln9) ??窠?jīng)毒素(35肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1mg
小鼠組織金屬抑制因子2(TIMP2)ELISA試劑盒 ,英文名: TIMP2 ELISA Kit
鴨主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA檢測試劑盒Duckmajorhistocompatibilitycomplex,MHCELISAKit 96T/48T
犬胰腺甘油三酯脂酶(PNLIP)免疫試劑盒 Dog Pancreatic iacylglycerol lipase,PNLIP ELISA kit
英文名稱MouseAβ1-40proteinELISAKit小鼠Aβ1-40蛋白規(guī)格:96T/48T
同酸待測樣品處理試劑盒20次
RatFibrinogenDegradationProduct,FDPELISA試劑盒大鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
無色桿菌屬通用PCR檢測試劑盒(2-Benzothiazolylthio)acetic acid 6295-57-4 中文名:2-(苯并噻唑基硫代)乙酸 分子式:C9H7NO2S2 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA試劑盒 96T/48T
(1S,2S)-1-Amino-2-Indanol 163061-74-3 中文名:(1S,2S)-1-氨基-2-茚醇 分子式:C9H11NO 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠鈣通道阻滯劑(CCB)ELISA試劑盒 96T/48T
(1S,2R)-2-Amino-1,2-diphenylethanol 23364-44-5 中文名:(1S,2R)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇 分子式:C14H15NO 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA試劑盒 96T/48T
(1S,2R)-1-Amino-2-indanol 126456-43-7 中文名:(1S,2R)-1-氨基-2-茚醇 分子式:C9H11NO 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠干擾素-a(mouse IFN-a) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝
(1S)-4,5-Dimethoxy-1-[(methylamino)methyl]benzocyclobutane 866783-13-3 中文名: 分子式:C12H18ClNO2 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠干擾素-b(mouse IFN-b) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝