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蜜蜂球囊菌PCR檢測試劑盒

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更新時間:2023-03-14 12:18:18瀏覽次數(shù):191

聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,,謝謝!

產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 用于科研
英文名稱 Ascosphaera apisPCR 儲存條件 -20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融
分類 PCR檢測試劑盒    
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單增李斯特菌PCR檢測試劑盒

詳細(xì)介紹

特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!

產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

蜜蜂球囊菌PCR檢測試劑盒

Ascosphaera apisPCR

50T

儲存條件:
僅用于科研14或-20樣品收集,、處理及保存方法
1.
血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2.
血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3.
細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4.
組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5.
保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,,凍存于-20
,,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

詳1.png

定量PCR方法:

熒光定量PCR探針法

熒光定量PCR SYBR Green染料法

快速PCR

多重 PCR

探針法即除了引物外另外設(shè)置一個探針,,在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),這個時候,,兩個平衡不發(fā)光,,但是當(dāng)DNA通過引物合成的時候,,探針被折斷,釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán),,兩個距離較遠(yuǎn),,發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光,被機(jī)器收集到信號,,從而檢測基因的量

染料能夠與雙鏈結(jié)合,,當(dāng)PCR擴(kuò)增的時候,染料結(jié)合到DNA上,,從而發(fā)光,,單個的染料不發(fā)光,這樣就能收集到信號,,我們可以看出,,染料法特異性不強(qiáng),,只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光,。

在快速PCR中,通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴(kuò)增,,且不會影響擴(kuò)增產(chǎn)量和效率,。快速循環(huán)條件尤其適用于具有高擴(kuò)增能力的DNA聚合酶,,這類聚合酶在每個結(jié)合中可引入更多的核苷酸,。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時間的1/21/3,卻能維持較高的擴(kuò)增效率,。此外,,如果引物的退火和延伸溫度相差無幾,則可將它們合并為一步,,以進(jìn)一步縮短PCR時間,。這一過程也被稱為 兩步PCR法。

多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定和病原微生物,,某些遺傳病及癌基因的分型鑒定,。多種病原微生物的同時檢測或鑒定,是在同一PCR反應(yīng)管中同時加上多種病原微生物的特異性引物,,進(jìn)行PCR擴(kuò)增.可用于同時檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染,。


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PCR實驗步驟:
取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其溶解,。
兩相分離 每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2mllvfang,,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,,1530孵育23分鐘,。412000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%
RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,,混勻后1530孵育10分鐘后,于412000rpm 離心10分鐘,。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊,。
RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),,清洗RNA沉淀,。混勻后,,47000rpm離心5分鐘,。
RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘,。
溶解RNA沉淀 溶解RNA時,,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其溶解,,獲得的RNA溶液保存于-80待用,。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,,讀取其在分光光度計260nm280nm處的吸收值,,測定RNA溶液 濃度和純度
Goat Anti-Bovine IgG/PE-Cy7 PE-Cy7
標(biāo)記的羊抗IgG 0.1ml

FAIM1 FAS凋亡抑制分子1抗體 0.2ml

神經(jīng)細(xì)胞粘附分子1抗體 Anti-CD56/NCAM1 0.1ml

Anti-Nurr1/FITC 熒光素標(biāo)記核受體相關(guān)因子-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh PLCG 2/PLC gamma 2 0酯酶Cγ2抗體 規(guī)格 0.2ml

Goat Anti-rat IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗大鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒 ,英文名: TGFβ2 ELISA Kit

小鼠甲狀腺素抗體(TAb)ELISA檢測試劑盒MouseThyroxineaibody,TAbELISAKit 96T/48T

人抗U1小核核糖核蛋白70kDa(SNP70)抗體免疫試劑盒 Human ai U1 small nuclear ribonucleoprotein 70kDa(SNP70)aibody ELISA kit

RabbitVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISAKit兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

載玻片細(xì)胞IGF蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20

Humanβ-siteAPP-CleavingEnzyme1,,1BACE1ELISA試劑盒人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
蜜蜂球囊菌PCR檢測試劑盒22RV1 前列腺癌細(xì)胞DL-異亮DL-Isoleucine質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR

MDCK-EGFP-puro(慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)狗腎上皮細(xì)胞 MDCK-EGFP-puro (leiviral consuct stable sains of canine renal epithelial cells) EMEM+10%FBS+1%P/S+2ug/ml puromycinL--γ-芐酯L-Glutamic acid γ-benzyl ester質(zhì)量規(guī)格:0.98

PDGFC Protein Human 重組 PDGF-C / SCDGF 蛋白 (His 標(biāo)簽)L-苯丙芐酯鹽酸鹽L-Phenylalanine benzyl ester  質(zhì)量規(guī)格:0.98

肺泡上皮細(xì)胞 (HPAEpiC)( 1×106 ) rCF, 大鼠心臟成纖維細(xì)胞 RattusL-脯芐酯鹽酸鹽L-Proline benzyl ester 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

球狀少突細(xì)胞培養(yǎng)基OsM-prfL--L-谷鹽L-Arginine L-glutamate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
使用方法
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 6 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1.
標(biāo)記 6 個離心管,,分別為 7,,65,,4,,32,。
2.
用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,,*用帶芯槍頭,,下同)。
3.
7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,,試劑盒提供),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
4.
換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
5.
換槍頭,,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
6.
重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
二,、樣品 DNA 的制備
7.
用自選方法純化樣品的 DNA,,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8.
如果有 N 個樣品,,則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取,,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管,。
三,、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9.
如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+9 PCR 管,,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),,6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+4 PCR 管,,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),,1 個用于PCR 陽性對照,。


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