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更新時間：2023-03-16 09:35:23瀏覽次數(shù)：296

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產(chǎn)品簡介

供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	50T
應用領域	化工	主要用途	用于科研
英文名稱	ECHO VirusRTPCR	儲存條件	-20℃避光保存,，避免反復凍融
分類	PCR檢測試劑盒

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詳細介紹

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產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱：?？刹《?span>PCR檢測試劑盒
英文名稱：ECHO VirusRTPCR
規(guī)格：50T
分類：PCR檢測試劑盒
儲存條件：-20℃避光保存,，避免反復凍融。
運輸：低溫,、避光,，快遞免費送貨上門。

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后,，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉離心30 分鐘取上清,。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中,，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶（2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程：

一,、試劑準備

二,、操作步驟

1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,，而不能從無到有,，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物,?？梢允?span>DNA也可以是RNA，一般20多bp,，需要根據(jù)你的模板鏈設計,。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP,、dGTP,、dTTP各2mM
5．Taq酶

1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）???1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油,。

2．調整好反應程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴增,。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應,，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存,。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測,。

注意事項：
①加入試劑的順序應一致,，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值,。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存,。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質前使用,。