細胞名稱：VERO 非洲綠猴腎細胞
種屬：豬
年齡（性別）：80-90日齡
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
背景描述：ST細胞是由Mcclurkin·A· W等人于1960年建系,。ST細胞一般用于病毒增殖和分離，是豬細小病毒的理想宿主,；ST細胞可用于這類病毒的分離及增殖,。
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
溫度：37℃

VERO 非洲綠猴腎細胞的培養(yǎng)：體外神經細胞的培養(yǎng)已成為神經生物學研究中十分有用的技術手段,。神經細胞培養(yǎng)的主要優(yōu)點是:(1)分散培養(yǎng)的神經細胞在體外生長成熟后,能保持結構和功能上的某些特點, 而且長期培養(yǎng)能形成髓鞘和建立突觸聯系,這就提供了體內生長過程在體外重現的機會。(2)能在較長時間內直接觀察活細胞的生長,、分化,、形態(tài)和功能變化,便于使用各種不同的技術方法如相差顯微鏡、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡,、激光共聚焦顯微鏡、同位素標記,、原位雜交,、免疫組化和電生理等手段進行研究。(3)易于施行物理（如缺血,、缺氧）,、化學和生物因子（如神經營養(yǎng)因子）等實驗條件, 觀察條件變更對神經細胞的直接或間接作用。(4)便于從細胞和分子水平探討某些神經疾病的發(fā)病機制,，藥物或各種因素對胚胎或新生動物神經細胞在生長,、發(fā)育和分化等各方面的影響。 我們實驗室從80年代始開展了神經細胞的體外培養(yǎng)工作,，取得了一些經驗,，現將培養(yǎng)細胞分類及方法簡要介紹如下:

一、雞胚背根神經節(jié)組織塊培養(yǎng)

主要用于神經生長因子（NGF）等神經營養(yǎng)因子的生物活性測定,。在差倒置顯微鏡下觀察以神經突起的生長長度和密度為指標半定量評估NGF的活性,。

1、材料和方法 

（1）選正常受精的雞蛋,，置于37℃生化培養(yǎng)箱內孵化,，每日翻動雞蛋一次。

（2）取孵化8-12 d 的雞蛋, 用70% 酒精消毒蛋殼,，從氣室端敲開蛋殼,，用消毒鑷剝除氣室部蛋殼。

（3）用彎鑷鉤住雞胚頸部,，無菌條件下取出雞胚置小平皿內,，除去頭部后，腹側向上置滅菌毛玻璃片上,用眼科彎鑷子打開胸腹腔,，除去內臟器官,。

（4）在解剖顯微鏡下，小心除去腹膜,，暴露脊柱及其兩側，在椎間孔旁可見到沿脊柱兩側排列的背根節(jié)（圖1）,，用一對5號微解剖鑷小心取出,。

（5）置背根節(jié)于解剖溶液內,，用微解剖鑷去除附帶組織，接種于涂有鼠尾膠的玻璃或塑料培養(yǎng)瓶中,，在DMEM無血清培養(yǎng)液中培養(yǎng),。

2、結果

雞胚背根神經節(jié)在含神經生長因子(NGF, 2.5S,，20ng/ml)的無血清培養(yǎng)液中培養(yǎng)24 h,神經節(jié)長出密集的神經突起,。而未加NGF的神經節(jié)培養(yǎng)24 h, 未見神經突起生長。

二,、新生大鼠,、新生小鼠及雞胚背根神經節(jié)分散細胞培養(yǎng)

背根神經節(jié)（DRG）細胞起源于神經嵴，NGF研究Levi-Montalcini的實驗表明,，外原性NGF能刺激DRG細胞生長發(fā)育并形成廣泛的神經網絡,。在體外，分離培養(yǎng)的神經節(jié)在NGF存在的情況下,，神經突起的生長在一天之內可長達數毫米,，因此，利用培養(yǎng)的DRG細胞,，進行軸突生長發(fā)育的研究,，是為經典而常用的方法之一。

1,、材料和方法 

取新生一天的大鼠(wistar種)和小鼠(昆明種),。用眼科剪在無菌條件下除去背部皮膚, 然后剪取一段脊髓,背側朝上置于滅菌毛玻璃片上,在解剖顯微鏡下沿椎管兩側水平剪除腹側一半椎骨,暴露脊髓和神經節(jié),用解剖鑷分離出神經節(jié)。雞胚背根神經節(jié)的取材方法同前,。 剝除神經節(jié)被膜, 用0.125%胰蛋白酶消化(37℃ 30min)分散后用種植(Plating)培養(yǎng)液稀釋成0.2×105 個細胞/ml密度的細胞懸液,，接種于涂有鼠尾膠的35mm塑料培養(yǎng)皿中,每皿2ml細胞懸液置。置標本于36℃,、10%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。24h后傾去培養(yǎng)皿內種植培養(yǎng)液，改用飼養(yǎng)(Feeding)培養(yǎng)液培養(yǎng),。接種第3d, 在培養(yǎng)皿中分別加入細胞分裂抑制劑5-氟-2'-脫氧尿苷15μg/ml和尿苷35μg/ml以抑制非神經細胞的增殖, 作用48 h后更換新鮮飼養(yǎng)培養(yǎng)液,，以后每周換液兩次, 每次更換一半新鮮飼養(yǎng)培養(yǎng)液。   

2,、培養(yǎng)液成份

種植培養(yǎng)液: 80%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml,、NaHCO3 3.7g/L);10%胎牛血清; 10%馬血清;NGF 20ng/ml; 谷氨酰胺100μg/ml。脫氧核糖核酸酶 I 40μg/ml,。

飼養(yǎng)培養(yǎng)液: 95%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml,、NaHCO3  3.7g/L,)；5 % 馬血清； NGF 20ng/ml,；神經營養(yǎng)素 1ml/100ml,；谷氨酰胺100μg/ml。