ID8小鼠卵巢癌細胞轉(zhuǎn)染了NTKmT逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,，表達多瘤病毒中T抗原。血管性血友病因子的分泌和吸收熒光標記的低密度脂蛋白（LDL）證實了該細胞株的內(nèi)皮細胞特性,。細胞因子和脂多糖（LPS）可誘導(dǎo)細胞分泌MAdCAM-1和E選擇素,。TNF-α、IL-1和LPS的誘導(dǎo)是時間和濃度依賴,。早代數(shù)的未刺激細胞會分泌MAdCAM-1和VCAM-1,，但找過30代不分泌

產(chǎn)品特點
種屬：小鼠
組織來源：乳腺組織
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
ID8小鼠卵巢癌細胞背景描述該細胞轉(zhuǎn)染了NTKmT逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,，表達多瘤病毒中T抗原。血管性血友病因子的分泌和吸收熒光標記的低密度脂蛋白（LDL）證實了該細胞株的內(nèi)皮細胞特性,。細胞因子和脂多糖（LPS）可誘導(dǎo)細胞分泌MAdCAM-1和E選擇素,。TNF-α、IL-1和LPS的誘導(dǎo)是時間和濃度依賴,。早代數(shù)的未刺激細胞會分泌MAdCAM-1和VCAM-1,，但找過30代不分泌。細胞會組成型分泌ICAM-1,，并且表達量會在LPS,、IL-1和TNF-α刺激下增多。P選擇素在早代數(shù)和晚代數(shù)細胞中受TNF-α誘導(dǎo)分泌,，但30代后分泌量增加,。

生長培養(yǎng)基：RPMI-1640(貨號:PM150110)＋10% FBS(貨號:164210-500)＋1% P/S(貨號:PB180120)
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
溫度：37℃

ID8小鼠卵巢癌細胞消化法：

實驗材料    細胞
試劑、試劑盒    胰蛋白酶酒精PBS
儀器,、耗材    超凈工作臺酒精燈酒精棉球培養(yǎng)箱顯微鏡吸管離心管離心機
實驗步驟    
一,、傳代前準備
 
1.  預(yù)熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,。
 
2.  用75%酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。
 
3.  正確擺放使用的器械,，保證足夠的操作空間,，不僅便于操作而且可減少污染。
 
4.  點燃酒精燈,，注意火焰不能太小,。
 
5.  準備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶，放入微波爐內(nèi)高火,，8分鐘再次消毒,。
 
6.  取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內(nèi),。
 
7.  從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細胞,，注意取出細胞時要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面,，再在鏡下觀察細胞,。
 
8.  打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時要在酒精燈上燒口消毒,。
 
9.  稍微搖搖,，然后從對側(cè)倒掉培養(yǎng)液,，用酒精棉球擦拭后一滴，注意要靠近酒精燈,。
 
二,、胰蛋白酶消化
 
1.  加入消化液：用PBS清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液）,，注意消化液的量以蓋住細胞,，消化溫度是37℃。
 
2.  顯微鏡下觀察細胞：倒置顯微鏡下觀察消化細胞,，若胞質(zhì)回縮,，細胞之間不再連接成片，表明此時細胞消化適度,，然后讓其停止消化,。
 
3.  倒掉消化液加入培養(yǎng)液，棄去胰蛋白酶液,，加入新鮮的培養(yǎng)液,。注意要在對測加入培養(yǎng)液。
 
三,、吹打分散細胞

1.  吹打制懸：用吸管將已經(jīng)消化細胞吹打成細胞懸液,。
 
2.  吸細胞懸液入離心管：將細胞懸液吸入10 ml 離心管中。
 
3.  平衡離心：平衡后將離心管放入臺式離心機中,，以1 000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘,。
 
4.  棄上清液，加入新培養(yǎng)液：棄去上清液,，加入2 ml 培養(yǎng)液,，用滴管輕輕吹打細胞制成細胞懸液。
 
四,、分裝稀釋細胞
 
1.  分裝：將細胞懸液吸出分裝至2~3個培養(yǎng)瓶中,，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。
 
2.  顯微鏡下觀察細胞：倒置顯微鏡下觀察細胞量,，必要是計數(shù),。注意密度過小會影響傳代細胞的生長，傳代細胞的密度應(yīng)該不低于5×105/ml,，后要做好標記,。
 
五、傳代培養(yǎng)
 
用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶,，適當旋松瓶蓋,，放入CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。傳代細胞2小時后開始貼附在瓶壁上,。當生長細胞鋪展面積占培養(yǎng)瓶底面積25%時為一個+,，占50%為++,，占75%時為+++。
收起 
注意事項    
1.  嚴格的無菌操作
 
2.  適度消化：消化的時間受消化液的種類,、配制時間,、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響，消化過程中應(yīng)該注意培養(yǎng)細胞形態(tài)的變化,，一旦胞質(zhì)回縮,，連接變松散，或有成片浮起的跡象就要立即終止消化,。
 
附：0.25% 胰酶（胰蛋白酶,，Trypsin）
 
配方：100 ml PBS，0.25 g 胰酶,。
 
步驟：先配100 ml PBS,。 稱胰酶0.25 g。加入PBS中,，低速攪拌,。調(diào)pH7.4。過濾,，分裝,，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完,。
 
4T1小鼠乳腺癌細胞注意：低速很重要,，機械攪拌對酶是一種沖擊，如果起沫,，酶就變性了,。低溫，防止酶失活,；對難消化的細胞,，在上述配方中,，加入0.02 g 的EDTA（0.02%）