J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染了NTKmT逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,，表達(dá)多瘤病毒中T抗原,。血管性血友病因子的分泌和吸收熒光標(biāo)記的低密度脂蛋白（LDL）證實(shí)了該細(xì)胞株的內(nèi)皮細(xì)胞特性,。細(xì)胞因子和脂多糖（LPS）可誘導(dǎo)細(xì)胞分泌MAdCAM-1和E選擇素,。TNF-α、IL-1和LPS的誘導(dǎo)是時間和濃度依賴,。早代數(shù)的未刺激細(xì)胞會分泌MAdCAM-1和VCAM-1,，但找過30代不分泌

產(chǎn)品特點(diǎn)
種屬：小鼠
組織來源：乳腺組織
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞背景描述該細(xì)胞轉(zhuǎn)染了NTKmT逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，表達(dá)多瘤病毒中T抗原,。血管性血友病因子的分泌和吸收熒光標(biāo)記的低密度脂蛋白（LDL）證實(shí)了該細(xì)胞株的內(nèi)皮細(xì)胞特性,。細(xì)胞因子和脂多糖（LPS）可誘導(dǎo)細(xì)胞分泌MAdCAM-1和E選擇素。TNF-α,、IL-1和LPS的誘導(dǎo)是時間和濃度依賴,。早代數(shù)的未刺激細(xì)胞會分泌MAdCAM-1和VCAM-1，但找過30代不分泌,。細(xì)胞會組成型分泌ICAM-1,，并且表達(dá)量會在LPS、IL-1和TNF-α刺激下增多,。P選擇素在早代數(shù)和晚代數(shù)細(xì)胞中受TNF-α誘導(dǎo)分泌,，但30代后分泌量增加。

生長培養(yǎng)基：RPMI-1640(貨號:PM150110)＋10% FBS(貨號:164210-500)＋1% P/S(貨號:PB180120)
培養(yǎng)條件
氣相：空氣,，95%；CO2，5%
溫度：37℃

J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞消化法：

實(shí)驗(yàn)材料    細(xì)胞
試劑,、試劑盒    胰蛋白酶酒精PBS
儀器,、耗材    超凈工作臺酒精燈酒精棉球培養(yǎng)箱顯微鏡吸管離心管離心機(jī)
實(shí)驗(yàn)步驟    
一、傳代前準(zhǔn)備
 
1.  預(yù)熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液,、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,。
 
2.  用75%酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。
 
3.  正確擺放使用的器械,，保證足夠的操作空間,，不僅便于操作而且可減少污染。
 
4.  點(diǎn)燃酒精燈,，注意火焰不能太小,。
 
5.  準(zhǔn)備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶，放入微波爐內(nèi)高火,，8分鐘再次消毒,。
 
6.  取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內(nèi),。
 
7.  從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞,，注意取出細(xì)胞時要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面,，再在鏡下觀察細(xì)胞,。
 
8.  打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時要在酒精燈上燒口消毒,。
 
9.  稍微搖搖,，然后從對側(cè)倒掉培養(yǎng)液，用酒精棉球擦拭后一滴,，注意要靠近酒精燈,。
 
二、胰蛋白酶消化
 
1.  加入消化液：用PBS清洗（沖洗）,，加入適量消化液（胰蛋白酶液）,，注意消化液的量以蓋住細(xì)胞，消化溫度是37℃,。
 
2.  顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞,，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片,，表明此時細(xì)胞消化適度,，然后讓其停止消化。
 
3.  倒掉消化液加入培養(yǎng)液,，棄去胰蛋白酶液,，加入新鮮的培養(yǎng)液。注意要在對測加入培養(yǎng)液。
 
三,、吹打分散細(xì)胞

1.  吹打制懸：用吸管將已經(jīng)消化細(xì)胞吹打成細(xì)胞懸液,。
 
2.  吸細(xì)胞懸液入離心管：將細(xì)胞懸液吸入10 ml 離心管中。
 
3.  平衡離心：平衡后將離心管放入臺式離心機(jī)中,，以1 000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘,。
 
4.  棄上清液，加入新培養(yǎng)液：棄去上清液,，加入2 ml 培養(yǎng)液,，用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。
 
四,、分裝稀釋細(xì)胞
 
1.  分裝：將細(xì)胞懸液吸出分裝至2~3個培養(yǎng)瓶中,，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。
 
2.  顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞量,，必要是計(jì)數(shù),。注意密度過小會影響傳代細(xì)胞的生長，傳代細(xì)胞的密度應(yīng)該不低于5×105/ml,，后要做好標(biāo)記,。
 
五、傳代培養(yǎng)
 
用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶,，適當(dāng)旋松瓶蓋,，放入CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。傳代細(xì)胞2小時后開始貼附在瓶壁上,。當(dāng)生長細(xì)胞鋪展面積占培養(yǎng)瓶底面積25%時為一個+,，占50%為++，占75%時為+++,。
收起 
注意事項(xiàng)    
1.  嚴(yán)格的無菌操作
 
2.  適度消化：消化的時間受消化液的種類,、配制時間、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響,，消化過程中應(yīng)該注意培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)的變化,，一旦胞質(zhì)回縮，連接變松散,，或有成片浮起的跡象就要立即終止消化,。
 
附：0.25% 胰酶（胰蛋白酶，Trypsin）
 
配方：100 ml PBS,，0.25 g 胰酶,。
 
步驟：先配100 ml PBS。 稱胰酶0.25 g,。加入PBS中,，低速攪拌,。調(diào)pH7.4。過濾,，分裝,，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完,。
 
4T1小鼠乳腺癌細(xì)胞注意：低速很重要，機(jī)械攪拌對酶是一種沖擊,，如果起沫,，酶就變性了。低溫,，防止酶失活,；對難消化的細(xì)胞，在上述配方中,，加入0.02 g 的EDTA（0.02%）