小鼠乳腺癌細(xì)胞是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細(xì)胞株。當(dāng)4T1細(xì)胞注射到BALB/c小鼠中時(shí),，4T1細(xì)胞會(huì)自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤,，可轉(zhuǎn)移到肺、肝,、淋巴結(jié)和大腦,，同時(shí)在注射部位形成始發(fā)灶，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移時(shí)不需要摘除始發(fā)灶

小鼠乳腺癌細(xì)胞參考說明書
種屬：小鼠
組織來源：乳腺組織
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
小鼠乳腺癌細(xì)胞背景描述：4T1細(xì)胞是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細(xì)胞株,。當(dāng)4T1細(xì)胞注射到BALB/c小鼠中時(shí),，4T1細(xì)胞會(huì)自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤，可轉(zhuǎn)移到肺,、肝,、淋巴結(jié)和大腦，同時(shí)在注射部位形成始發(fā)灶,，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移時(shí)不需要摘除始發(fā)灶,。4T1細(xì)胞在BALB/c小鼠中的生長與轉(zhuǎn)移特性與人體中的乳腺癌十分相近，這種腫瘤是人Ⅵ期乳腺癌的動(dòng)物模型,。4T1細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤在手術(shù)后及未手術(shù)情況下轉(zhuǎn)移的動(dòng)力學(xué)相近,，可以用作手術(shù)后及未手術(shù)模型。4T1細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤模型跟其他腫瘤模型相比,，由于4T1細(xì)胞的抗6-硫鳥嘌噙特性,，微小的轉(zhuǎn)移細(xì)胞團(tuán)(少到僅僅1個(gè))也可以在許多遠(yuǎn)端器官中檢測到，沒必要數(shù)淋巴結(jié)或稱重器官,。
生長培養(yǎng)基：RPMI-1640(貨號(hào):PM150110)＋10% FBS(貨號(hào):164210-500)＋1% P/S(貨號(hào):PB180120)
培養(yǎng)條件
氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
溫度：37℃

小鼠乳腺癌細(xì)胞傳代方法：

實(shí)驗(yàn)方法原理    培養(yǎng)細(xì)胞傳代根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法,。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代；部分貼壁生長的細(xì)胞用直接吹打可傳代,；懸浮生長的細(xì)胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代,，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打傳代,。
實(shí)驗(yàn)材料    細(xì)胞
試劑,、試劑盒    D-Hanks液小牛血清RPMI1640雙抗胰蛋白酶EDTANHClNaHCO3
儀器,、耗材    凈化工作臺(tái)離心機(jī)恒溫水浴箱冰箱倒置相差顯微鏡培養(yǎng)箱吸管玻璃瓶培養(yǎng)瓶廢液缸吸頭槍頭膠塞離心管量加樣槍 紅血球計(jì)數(shù)板
實(shí)驗(yàn)步驟    
1.  貼壁細(xì)胞的消化法傳代：

（1）吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。

（2）D-Hanks液洗2～3次,。
 
（3）向瓶內(nèi)加入適量消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶,，使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

（4）然后吸掉或倒掉消化液后再加適量新的消化液,，輕輕搖動(dòng)再倒掉大部分消化液,，僅留少許進(jìn)行消化（也可不采用上述步驟直接加消化液進(jìn)行消化）。
 
（5）消化在37℃或室溫25℃以上環(huán)境下進(jìn)行,。

（6）消化2～5 min 后把培養(yǎng)瓶放置顯微鏡下進(jìn)行觀察,，發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大后,，應(yīng)立即終止消化,。
 
（7）吸除或倒掉消化液，如用EDTA消化,，需加Hanks液數(shù)毫升,，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶把殘留消化液沖掉。

（8）再加培養(yǎng)液,。如僅用胰蛋白酶可直接加少許含血清的培養(yǎng)液,，終止消化。
 
（9）用彎頭吸管,，吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液,，反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，吹打過程要順序進(jìn)行,。

（10）從培養(yǎng)瓶底部一邊開始到另一邊結(jié)束,，以確保所有底部都被吹到，使細(xì)胞脫離瓶壁后形成細(xì)胞懸液,。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔不要用力過猛,。 
 
（11） 計(jì)數(shù)，分別接種在新的培養(yǎng)瓶內(nèi),。
 
2.  懸浮細(xì)胞的傳代：懸浮細(xì)胞傳代可離心收集細(xì)胞后傳代,，或直接傳代。

離心傳代法：

（1） 將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到15 ml 離心管內(nèi),。
 
（2） 離心800~1000 rpm，5 min,。
 
（3） 棄去上清,，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，用吸管吹打形成細(xì)胞懸液,。
 
（4） 計(jì)數(shù),，分別接種在新的培養(yǎng)瓶內(nèi),。
 
（5）直接傳代即讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清液吸掉1/2~2/3,，然后用吸管吹打形成細(xì)胞懸液后再傳代,。

3.  部分貼壁細(xì)胞的傳代

（1）部分貼壁不牢的細(xì)胞，如Hela細(xì)胞等,，不經(jīng)消化處理直接吹打可使細(xì)胞從壁上脫落下來,，而進(jìn)行傳代。

（2）對絕大部分貼壁生長的細(xì)胞,，因直接吹打?qū)?xì)胞損傷較大,，細(xì)胞常有較大數(shù)量的丟失，因而需消化后,，才能吹打傳代,。
收起 
注意事項(xiàng)    
1.  胰蛋白酶要預(yù)溫，溫度37℃左右為宜℃,。

2.  離心轉(zhuǎn)速要合適,，轉(zhuǎn)速過低，不能有效分離細(xì)胞,，離心速度過大,，時(shí)間過長，會(huì)擠壓細(xì)胞造成損傷甚至死亡,。

3.  要定時(shí)觀察細(xì)胞,，發(fā)現(xiàn)污染，應(yīng)及時(shí)處理,。