產(chǎn)品簡(jiǎn)介
供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
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主要用途 | 僅供科研 |
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上海雅吉生物科技有限公司 |
—— 銷(xiāo)售熱線(xiàn) ——
15821073967 |
參考價(jià) | ¥100 |
訂貨量 | 1 |
更新時(shí)間:2024-11-03 18:23:31瀏覽次數(shù):204
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供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
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主要用途 | 僅供科研 |
產(chǎn)品及特點(diǎn) 大腸桿菌JM110化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌 JM110 菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,,可用于 DNA
的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)本產(chǎn)品,,轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 106,。本產(chǎn)品為 dam-,dcm-
的菌株,,排除 dam,,dcm 甲基化的影響。
菌株基因型為:dam dcm supE44 hsdR17 thi leu rpsLlacY galK galT ara tonAthrtscΔ(lac-proAB) F-[traD36 proAB+lacIq lacZΔM15]
規(guī)格及成分 成分 編號(hào) 包裝
本產(chǎn)品 130511 0.1 mL×10
使用手冊(cè) 1 份
運(yùn)輸及保存 干冰運(yùn)輸,、-80℃保存,,有效期半年。
自備試劑 目的 DNA,、SOC 或 LB 培養(yǎng)基等
大腸桿菌JM110化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞使用方法 1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100μL,可以根據(jù)
實(shí)際情況分裝使用,。
以下實(shí)驗(yàn)以 50 μL 感受態(tài)細(xì)胞為例,。
2. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA(根據(jù)實(shí)際情況加入適量
的 DNA,,通常 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞能夠被 1 ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 所飽和),,用移液器
輕輕吹打混勻,,冰浴 30 分鐘。
3. 42℃熱擊 45 秒,,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,,冰上靜置 2-3 分鐘。
4. 每個(gè)離心管中加入 450 μL 無(wú)菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基(不含抗生素),,混勻后置于 37℃
搖床,,150 rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘使菌體復(fù)蘇。
5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,,加到含相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB 固體
瓊脂培養(yǎng)基上,用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi),,將平板置于 37℃直至液體被吸收,,
倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí),。
注意:
1. 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整,。若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多,可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板,;
若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少,,可取 200-300 μL 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較
少,,可通過(guò)離心(4,000 rpm,,2 分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于
平板中,。
2. 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,,可將平板正置于 37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存,,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少,,可以將剩下的菌液再
涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。