大腸桿菌DH10Bac化學感受態(tài)細胞是大腸桿菌 BL21（DE3）plysS 菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞,，可用于DNA 的熱擊轉(zhuǎn)化。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測本產(chǎn)品,，轉(zhuǎn)化效率可達 107,。該菌株帶有質(zhì)粒plysS，具有氯霉素抗性,，此質(zhì)粒含有表達 T7 溶菌酶的基因,，T7 溶菌酶能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾 IPTG 誘導的表達

產(chǎn)品及特點

大腸桿菌DH10B化學感受態(tài)細胞是采用特殊工藝處理得到的大腸桿菌 DH10 Bac 感受態(tài)細胞,，適用于昆蟲桿狀病毒 Bac-to-Bac 系統(tǒng)中同源重組的菌株,，用于產(chǎn)生重組 Bacmid。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測,，
本產(chǎn)品轉(zhuǎn)化效率可達 107CFU/μg,。
DH10Bac 細胞包含親本 Bacmid bMON14272 和輔助質(zhì)粒 pMON7124。親本
Bacmid 包含一個 mini-F 復制子,、卡那霉素抗性基因,、att Tn7 位點和 lac Zα-互補因子。
輔助質(zhì)粒包含 tns ABCD 區(qū)域,，該區(qū)域提供了 mini-Tn7 從供體質(zhì)粒插入親本 Bacmid 靶
位點所需要的轉(zhuǎn)座蛋白,。供體如 pFastBac 系列質(zhì)粒（pFastBac1，pFastBacDual 等）
含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重組臂,，Tn7R 和 Tn7L 之間包含慶大霉素抗性基因,、昆蟲病毒
多角體基因啟動子、多克隆位點和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信號,。當含有靶基因 pFastBac
的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到 DH10Bac 細胞后,，發(fā)生重組后就可產(chǎn)生重組 Bacmid，提取純化重組
Bacmid 轉(zhuǎn)染昆蟲細胞 Sf9 或 Sf21 就可以包裝產(chǎn)生昆蟲病毒,。此外,，DH10Bac 細胞中的
The φ80dlacZDM15 基因的產(chǎn)物可以實現(xiàn)β-半乳糖苷酶的α-互補現(xiàn)象，用于重組 bacmid
的藍白斑篩選,。

菌株基因型為：F
- mcrA Δ(mrr
-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1
endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-
rpsL nupG/pMON14272/pMON7124
規(guī)格及成分 成分 編號 包裝
本產(chǎn)品 140576 0.1 mL×10
使用手冊 1 份

運輸及保存 干冰運輸,、-80℃保存，避免反復凍融,，有效期半年,。
自備試劑 重組質(zhì)粒、SOC 或 LB 培養(yǎng)基等
大腸桿菌DH10B化學感受態(tài)細胞使用方法 1. 制備含 有如 下抗生 素的 LB 固 體平板 ：50 μ g/mL Kanamycin ,，7 μ g/mL
gentamicin,，10 μg/mL tetracycline，100 μg/mL X-gal,，40 μg/mL IPTG,。
2. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為 50-100 μL,，可以根據(jù)
實際情況分裝使用,。
以下實驗以 100 μL 感受態(tài)細胞為例,。
3. 待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入 1-10 ng 重組質(zhì)粒,，用移液器輕輕吹
打混勻,，冰浴 30 分鐘。
4. 42℃熱擊 90 秒,，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,，冰上靜置 2-3 分鐘。
5. 每個離心管中加入 900 μL 無菌的 SOC（不含抗生素）,，混勻后置于 37℃ 搖床,，
200rpm 振蕩培養(yǎng) 4 小時。
6. 用 SOC 培養(yǎng)基進行 10 倍梯度稀釋,，如分成 3 個稀釋梯度 10-1
,10-2
,10-3,。
7. 取 100 μL 的各個梯度的培養(yǎng)物用于涂布。等平板中的液體*吸收后,，倒置平板,，
37℃培養(yǎng) 24-48 小時。
8. 保留剩余的菌液保存于 4℃,，視平板上菌落生長情況決定去留,。
注意：
1. 涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。
2. 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,，可將平板正置于 37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng),。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少,，可以將剩下的菌液再
涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng),。